Анализ клеща расшифровка анализа

Иксодовые клещевые боррелиозы

Возбудители боррелиозов относятся к порядку Spirochaetales, семейству Spirochaetaceae, роду Borrelia. В группу иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ) входят заболевания, вызываемые в большинстве случаев тремя представителями комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato: B.burgdorferi, B.garinii и B.afzelii. Изучается патогенный потенциал других боррелий комплекса: B.valaisiana, B.lusitaniae, B.bissettii, B.sinica. Ареал распространения этих видов боррелий в основном совпадает с территорией обитания клещей I.persulcatus и I.ricinus, играющих одновременно роль переносчика и резервуара инфекции. Спонтанная инфицированность боррелиями клещей вида:

I. ricinus составляет в среднем 20%, клещей I.persulcatus – 40%. Сезон активности иксодовых клещей начинается в последней декаде апреля и продолжается в средней полосе России до октября, а в Приморье – до ноября. ИКБ распространен в России на 69 административных территориях, наибольшая заболеваемость регистрируется в Кировской, Томской и в последние годы – Вологодской и Ярославской областях. Клинически выраженное заболевание развивается приблизительно в 20% случаев после присасывания инфицированных боррелиями клещей. В результате попадания боррелий в кожу у 50–80% больных отмечается местное кожное воспаление – клещевая мигрирующая эритема, диаметр которой, как правило, превышает 5 см. В 20–50% случаев заболевания эритема отсутствует в начале заболевания и таким образом сразу развивается диссеминированная стадия ИКБ, которая носит название безэритемной формы. В случае гематогенного распространения боррелии поражают внутренние органы, что сопровождается развитием общеинфекционного синдрома и клиническими проявлениями со стороны висцеральных органов (печени, селезенки, сердца, почек). В случае поражения нервной системы возникают менингит (менингоэнцефалит), радикулоневрит, неврит черепных нервов. Наиболее часто поражается VII пара черепных нервов, нередко с парезом лицевых мышц, что является еще одним, кроме эритемы, характерным признаком ИКБ. В ряде случаев, особенно при поздно начатом лечении, заболевание переходит в третью – хроническую – стадию, для которой в настоящее время доказана только одна клиническая форма – хронический атрофический акродерматит. Следует отметить, что у определенной части больных не наступает полное выздоровление в течение длительного времени после острого периода, может до двух лет сохраняться субфебрилитет, длительно – артриты, прогрессирующий энцефаломиелит, энцефалопатии, патологические изменения со стороны сердечно-сосудистой системы.

Показания к обследованию

• Обращение пациента за медицинской помощью с апреля по октябрь;
• факт присасывания клеща или пребывание на природе: в лесной, лесопарковой зоне, в загородных домах и прилегающих к ним территориях;
• развитие общеинфекционного синдрома;
• появление мигрирующей эритемы.

Дифференциальная диагностика. Инфекционные заболевания, передаваемыми иксодовыми клещами; рожистое воспаление; склеродермия; артрит ревматоидный или иной этиологии; миокардит; заболевания ЦНС иного генеза.

Материал для исследований

• Биоптаты кожи – микроскопические исследования, изоляция боррелий культуральным методом, обнаружение ДНК;
• цельная кровь – изоляция боррелий культуральным методом, обнаружение ДНК;
• сыворотка крови – выявление специфических АТ;
• СМЖ – выявление специфических АТ (при развитии серозных менингитов), изоляция боррелий культуральным методом, обнаружение ДНК;
• моча – обнаружение ДНК;
• синовиальная жидкость – выявление специфических АТ (при артритах), изоляция боррелий культуральным методом, обнаружение ДНК.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выявление возбудителя методом микроскопии, изоляцию боррелий с использованием культурального метода, обнаружение ДНК боррелий, выявление специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Обнаружение специфических АТ IgM и IgG – наиболее часто используемый метод лабораторной диагностики ИКБ. Применение РНИФ позволяет обнаружить АТ у 40–50% больных в первые 2–4 недели заболевания, а при исследовании образцов крови в динамике, взятой с интервалом в 1–3 месяца, удается подтвердить ИКБ в 60–70% случаев. Диагностически значимым титром в данной реакции считается положительный результат при разведении сыворотки 1:40, а также четырехкратное нарастание титра АТ во второй из взятых проб относительно первой.

При определении АТ методами ИФА, ИХЛА и т. п. в основном используются несколько (от 4 до 8) рекомбинантных АГ боррелий, относящихся к разным геновидам. Методы обладают большей диагностической чувствительностью в сравнении с РНИФ. АТ IgM начинают обнаруживаться к концу второй недели заболевания, АТ IgG – на 3–4-й неделе заболевания. Обнаружение АТ IgM отмечают у 50% больных с хронической формой ИКБ, что, видимо, связано с изменением антигенных детерминант во время персистенции боррелий в организме больного. Данные о диагностической чувствительности выявления АТ на разных стадиях заболевания приведены в таблице.

Диагностическая чувствительность определения специфических антител при ИКБ

Стадия заболевания	АТ IgM	АТ IgG	АТ IgM+IgG
Острая (I)	45–70%	40–80%	90%
Подострая (II)	30–60%	65–100%	90–100%
Хроническая (III)	5–50%	до 100%	до 100%

При лабораторном подтверждении нейроборрелиоза для определения наличия интратекального синтеза АТ проводится выявление специфических АТ в сыворотке крови и СМЖ. Относительное увеличение концентрации специфических IgG в ЦНС можно определить путем вычисления ликвор-сывороточного индекса (ЛСИ). Для этой цели определяют концентрацию специфических Ig (титр) и общих Ig (г/л) в сыворотке крови и СМЖ.

ЛСИ = (специфические IgG (СМЖ) * общие IgG (сыворотка)) / (общие IgG (СМЖ) * специфические IgG (сыворотка))

Значения ЛСИ больше 2-х расцениваются как положительные и указывают на наличие синтеза специфических иммуноглобулинов клетками глиальной ткани.

Ложноположительные результаты при выявлении АТ методами РНИФ и ИФА могут быть получены у больных с другими спирохетозами: сифилисом и лептоспирозом, у пациентов с ревматоидным артритом неборрелиозной этиологии и другими системными заболеваниями, у пациентов с герпес-вирусной инфекцией, вызванной ЦМВ и вирусом Эпштейн-Барр, а также у беременных.

Для подтверждения специфичности результатов выявления АТ методами РНИФ и ИФА используют метод ИБ, который позволяет обнаружить специфические АТ к определенным белкам возбудителя. В качестве АГ в основном используются рекомбинантные белки p83-100, p58, p41i, p39 (BmpA), OspC (p20-25), p17 (DbpA), BBK32, VlsE, полученные для двух, а иногда и для трех видов боррелий.

Микроскопия (световая, фазовоконтрастная, темнопольная, электронная) биологического материала (СМЖ, кровь, синовиальная жидкость, биоптаты тканей) не имеет широкого применения из-за низкой концентрации возбудителя (в среднем концентрация боррелий в 1 мл биологического материала не превышает 10 000 микробных клеток), за исключением биоптатов кожи. В основном микроскопические исследования используются при контроле культуральных методов и как один из методов при оценке инфицированности боррелиями иксодовых клещей.

При применении для изоляции боррелий культурального метода в качестве среды для культивирования используется модифицированная среда BSK (BarbourStoenner- Kelly). Важным условием является получение образцов биологического материала до начала антибиотикотерапии. Из кожных биоптатов удается изолировать боррелии в 50–60% случаев при наличии клещевой мигрирующей эритемы и в 90% – при хроническом атрофическом акродерматите. При исследовании крови, СМЖ, синовиальной жидкости процент положительных результатов ниже – в среднем 20%. Этот метод не имеет широкого практического применения как диагностический в виду его длительности (от 3–4 до 10 недель) и высокой стоимости.

Выявление ДНК боррелий с использованием молекулярно-биологических методов (преимущественно ПЦР) целесообразно применять в комплексе с выявлением АТ. Прямым показанием для применения ПЦР являются боррелиозные менингиты, менингоэнцефалиты, наличие атипичной эритемы, рефрактерные артриты у пациентов с наличием АТ к боррелиям. Диагностическая чувствительность данного метода составляет от 20 до 35% при исследовании крови в остром периоде на первой неделе заболевания, от 20 до 80% при исследовании синовиальной жидкости при развитии Лайм-артрита и около 10–30% – при исследовании СМЖ при нейроборрелиозе. Метод позволяет также идентифицировать вид боррелий, вызвавших заболевание. Обнаружение ДНК и РНК боррелий методом ПЦР может быть выполнено во всех видах биологического материала (кровь, моча, биоптаты тканей, цереброспинальная и суставная жидкости и др.).

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Обнаружение ДНК патогенных боррелий комплекса B.burgdorferi sl в крови, СМЖ, синовиальной жидкости или моче пациента является основанием для предварительной постановки диагноза ИКБ. Выявление специфических АТ в образцах крови, взятых в динамике (сероконверсия в парных сыворотках крови) служит подтверждением этиологии заболевания.

Интерпретация результатов ИБ в основном сводится к алгоритму, представленному в таблицах .

Оценка результатов при выявлении антител IgM методом иммуноблота

Отрицательный	Положительный	Неопределенный
Не выявлены АТ ни к одному из АГ. Выявлены АТ только к АГ p83-100	Выявлены АТ к белку OspC. Выявлены АТ как минимум к двум АГ из группы: p41, VlsE, p17	Выявлены АТ только к одному АГ из группы p41, VlsE, p17 в сочетании или без АТ к АГ р58, p39, BBK32 или выявлены АТ к любому количеству АГ р58, p39, BBK32

Оценка результатов при выявлении антител IgG методом иммуноблота

Отрицательный	Положительный	Неопределенный
Не выявлены АТ ни к одному из АГ. Выявлены АТ только к АГ p17	Выявлены АТ к белку VlsE. Выявлены АТ как минимум к двум АГ из группы: p83-100, p58, p41, p39, BBK32, OspC, p17	Выявлены АТ только к одному АГ из группы: p83-100, p58, p41, p39, BBK32, OspC

Комплекс антител, выявляемый на разных стадиях

Стадия заболевания	АГ, к которым выявлены АТ IgM	АГ, к которым выявлены АТ IgG
Острая (I)	OspC, p41, p17, VlsE	P41, BBK32, p17, OspC, VlsE
Подострая (II)	OspC, p41, p17, BBK32, VlsE	p17, p41, VlsE, OspC, BBK32, p58
Хроническая (III)	OspC, p41, VlsE, P39, p58	p17, BBK32, p41, p58, VlsE, p83-100, OspC, p39

Определенные сложности использования для диагностики ИКБ методов выявления специфических иммуноглобулинов связаны с присутствием анамнестических АТ у большой части населения, проживающего на эндемичной территории, и низкой скоростью роста уровня АТ, что является особенностью боррелиозной инфекции. Очень медленные изменения уровня АТ к боррелиям (как повышение, так и снижение) также не позволяют использовать оценку уровня АТ для контроля эффективности терапии. Учитывая замедленное образование АТ при боррелиозах, при получении однократного отрицательного результата повторяют исследование в пробе крови, взятой через месяц.

Источник

Антитела к вирусу клещевого энцефалита lgG колич.

Описание

Антитела к вирусу клещевого энцефалита lgG количественный — количественное определение антител IgG к вирусу клещевого энцефалита, которые свидетельствуют о наличии острого или перенесённом в прошлом заболевания. IgG в количественном формате позволяет провести динамическое наблюдение, оценить состояние постъинфекционного иммунитета к вирусу клещевого энцефалита.

Вирус клещевого энцефалита — РНК-содержащий вирус семейства Flaviviridae, который входит в группу арбовирусов, то есть переносчиками являются насекомые.

Переносчики вируса клещевого энцефалита — иксодовые клещи.

Основной путь заражения — укус клеща. Также возможен фекально-оральный путь инфицирования, то есть посредством зараженной пищи — при употреблении сырого молока от инфицированных этим вирусом коз и коров.

Вирус является возбудителем клещевого энцефалита.

Клещевой энцефалит — это сезонное (весенне-летнее) вирусное заболевание, поражающее в основном центральную нервную систему. Попадая в кровь, проникает в ЦНС и способен размножаться и повреждать нервные клетки, вызывая парезы и параличи.

Длительность инкубационного периода от 8 дней до 3 недель (чаще 10–12 дней).

Клиническая картина при клещевом энцефалите
Клинические проявления заболевания разнообразны. Выделяют 3 основных синдрома заболевания: общий инфекционный, менингиальный и очаговых поражений нервной системы. Заболевание начинается остро. Для него свойственна мгновенная слабость в конечностях, мышцах шеи, онемение кожи лица и шеи. Основные симптомы болезни: общее недомогание, головная боль, тошнота, разбитость, нарушение сна. У детей может возникнуть эпилептический припадок. Повышение температуры за 1–2 дня до 39–40°С. Лихорадка продолжается от 2 до 10 дней. В острый период болезни проявляется гиперемия кожи лица, шеи и груди, слизистой оболочки ротоглотки, инъекция склер и конъюнктив. Наблюдаются постоянные боли во всем теле и конечностях. Беспокоят мучительные мышечные боли. Возможны нарушения сознания (от лёгкой оглушённости до комы). Наиболее типичны вялые параличи и парезы шейно-плечевой мускулатуры (симптом «свисания головы»), поражения черепных нервов и менингиальные признаки (резкая головная боль, ригидность мышц).

Иногда наблюдается волнообразное течение вирусного клещевого энцефалита. В таком случае, через 1–2 недели после завершения первой волны заболевания наступает вторая, которая протекает тяжелее и длится дольше.

Заболевание может протекать в виде латентной (скрытой), персистентной или хронической инфекции.

При тяжёлой энцефалитной форме с очаговыми симптомами наблюдается поражение ЦНС и длительный период выздоровления, до 2 лет. Развившиеся атрофические параличи мышц восстанавливаются частично.

Часто вирусный клещевой энцефалит протекает в лёгких и стёртых формах с коротким лихорадочным периодом, отсутствием или почти незаметными оболочечными и очаговыми симптомами.

Антитела к вирусу клещевого энцефалита
При инфицировании лимфоциты вырабатывают иммуноглобулины — специальные белки, нейтрализующие бактерии. АТ IgG к вирусу клещевого энцефалита появляются в крови через 10–14 день после инфицирования и даже ранее. Достигают своего максимума к концу месяца и сохраняются на таком уровне в течение 2–6 месяцев после инфицирования. Антитела IgG обнаруживаются также и после вакцинации против клещевого энцефалита. Иногда здоровый человек может иметь циркулирующие IgG антитела к вирусу клещевого энцефалита вследствие не имевшего существенных клинических проявлений контакта с вирусом в прошлом. Число таких лиц больше в эндемичных областях. В комплексе с обнаружением IgM антител выявление факта сероконверсии IgG (появление в динамике заболевания специфических антител при их первоначальном отсутствии) подтверждает диагноз вирусного клещевого энцефалита.

Показания:

• дополнительно к тесту 11.406 на IgM антитела для диагностики вирусного клещевого энцефалита;
• оценка состояния иммунитета для вакцинации;
• эпидемиологические исследования.

Подготовка

Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Единицы измерения: Е/мл.

Альтернативные единицы измерения: титр.

Ориентировочное соответствие Е/мл и титров:

• 100 титр 1:100;
• 200 титр 1:200;
• 400 титр 1:400;
• 800 титр 1:800;
• 1600 титр 1:1600.

Результат выше 100 Е/мл говорит о наличии иммунного ответа (соответствует титру анти-ВКЭ IgG выше 1:100) и наблюдается в следующих ситуациях:

• текущая или имевшая место в прошлом инфекция вирусом клещевого энцефалита;
• вакцинирование против вируса клещевого энцефалита;
• инъекция специфического гамма-глобулина против вируса клещевого энцефалита (до 3-х недель после введения);
• ложноположительные результаты из-за перекрёстного реагирования вследствие инфекции или вакцинации другими флавивирусами (редко).

Результат меньше 100 Е/мл — отсутствие иммунного ответа:

• отсутствие инфекции;
• ранний период инфекции (рекомендуется повторить через 7–10 дней);
• недетектируемый уровень антител.

Примечание
При проведении исследования уровня IgG антител в целях оценки эффективности вакцинации следует учитывать следующее:

• в настоящее время не существует общепринятого, рекомендованного ВОЗ критерия протективного уровня концентрации антител к ВКЭ, как и не существует международного стандартного образца специфических иммуноглобулинов анти-ВКЭ IgG с концентрацией, выраженной в международных единицах. Присутствие специфических анти-ВКЭ IgG антител в крови человека коррелирует со снижением риска заболевания клещевым энцефалитом. Авторы публикаций по этой теме (2, 5) полагают, что успешной можно считать вакцинацию, если при исследовании не ранее чем через неделю после окончания полного курса вакцинации титр анти-ВКЭ-IgG составляет 1:400 и более (что, по приведенной выше таблице, соответствует 400 Е/мл и более, при использовании тест-систем «ВектоВКЭ IgG», фирма «Вектор Бест»).

Источник