Анализ пцр при укусе клеща

Анализ пцр при укусе клеща

Комплексное исследование крови, в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) выявляют возбудителей боррелиоза (Borrelia burgdorferi), моноцитарного эрлихиоза человека (Ehrlichia chaffeensis) и анаплазмоза человека (Anaplasma phagocytophilum).

ПЦР-диагностика боррелиоза, эрлихиоза и анаплазмоза.

Tick-borne diseases, polymerase chain reaction, PCR, Lyme disease, Human ehrlichiosis, Human anaplasmosis.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Клещевые инфекции представляют серьезную проблему для здоровья человека. Наибольшее значение имеют следующие клещевые инфекции:

• болезнь Лайма (клещевой боррелиоз), возбудителем заболевания является спирохета Borrelia burgdorferi;
• анаплазмоз, ранее известный как гранулоцитарный эрлихиоз, возбудителем заболевания является α-протеобактерия Anaplasma phagocytophilum.

В обоих случаях переносчиком инфекции являются иксодовые клещи Ixodess capularis, I. ricinus, I. pacificus и I. persulcatus. В России наибольшее значение имеют виды I. ricinus и I. persulcatus.

• моноцитарный эрлихиоз, возбудителем заболевания является α-протеобактерия Ehrlichia chaffeensis. Переносчик инфекции – иксодовые клещи Amblyomma americanum.

Клещевые инфекции обладают рядом общих свойств:

• Клиническая картина клещевых инфекций имеет много общих черт и неспецифична. Как правило, заболевание манифестирует в виде гриппоподобного синдрома с лихорадкой, головной болью, миалгией и артралгией. Дифференцировать клещевые инфекции между собой и с другими острыми инфекционными на основании только лишь клинической картины заболевания невозможно.
• Некоторые иксодовые клещи инфицированы сразу двумя (реже тремя) патогенами (коинфекция) и могут приводить к развитию у одного и того же человека сочетанной инфекции. Чаще описаны случаи сочетанного боррелиоза и анаплазмоза.

Учитывая эти особенности, при подозрении на клещевую инфекцию необходимо комплексное лабораторное исследование, включающее анализы на все значимые возбудители клещевых инфекций.

Для лабораторной диагностики клещевых инфекций могут применяться несколько методов, в том числе серологические тесты, анализ окрашенного мазка крови, бактериологический посев, иммуногистохимический анализ и методы молекулярной диагностики. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это один из методов молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в крови) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. Исследование обладает целым рядом преимуществ по сравнению с другими методами идентификации клещевых инфекций:

• Быстрота получения результата. ПЦР – это один из самых быстрых на сегодняшний день методов идентификации возбудителя. Благодаря этому, метод ПЦР считается самым опитмальным способом диагностики острой инфекции.
• Высокая чувствительность метода. Другой «быстрый» метод диагностики эрлихиоза – это окраска мазков крови по Гимзе. Обнаружение в мазках крови так называемых морул (скоплений микроорганизмов внутри лейкоцитов) – это характерный признак эрлихиоза и анаплазмоза. Морулы, однако, удается выявить не всегда: лишь в 3 % случаев моноцитарного эрлихиоза и 25-75 % случаев анаплазмоза. Чувствительность же ПЦР анализа достигает 85 % в отношении E. chaffeensis и 90 % в отношении A. phagocytophilum, что позволяет считать ПЦР самым точным среди быстрых методов диагностики клещевых инфекций.
• Высокая специфичность (60-85 %). Специфичность метода особенно важна для дифференциальной диагностики клещевых инфекций. Известно, что, например, серологические тесты на клещевые инфекции часто дают ложноположительный результат из-за наличия перекрестных реакций, обусловленных общими антигенными свойствами указанных микроорганизмов. Так как в ПЦР используются специфические для каждого из микроорганизмов праймеры, вероятность ложноположительного результата гораздо ниже.

Следует отметить ограничения метода ПЦР:

• Так как в реакции определяется ДНК как живых, так и погибших микроорганизмов, метод ПЦР не предназначен для оценки эффективности лечения: результат будет оставаться положительным еще в течение некоторого времени после начала эффективного лечения.
• Чувствительность ПЦР в меньшей степени, чем других методов идентификации возбудителя, зависит от приема антибиотиков. Наиболее точный результат, однако, будет получен при взятии образца биоматериала до начала лечения антибактериальными препаратами.

В диагностике клещевых инфекций также могут помочь дополнительные лабораторные исследования. Так, характерной чертой эрлихиозов является панцитопения и умеренное повышение печеночных трансаминаз. При тяжелом течении заболевания могу наблюдаться гипонатриемия, гипокальциемия, гипомагниемия, повышение креатинина и мочевины и признаки ДВС-синдрома.

Следует отметить, что иксодовые клещи также являются переносчиками вируса клещевого энцефалита. При необходимости это комплексное ПЦР-исследование может быть дополнено исследованием на вирус клещевого энцефалита.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики боррелиоза, моноцитарного эрлихиоза и анаплазмоза.

Когда назначается исследование?

• При наличии у пациента гриппоподобного синдрома (лихорадки, головной боли, миалгии и артралгии) в сочетании с указанием на укус клеща;
• при обнаружении у пациента с лихорадкой «лабораторных» признаков клещевых инфекций: панцитопения, повышение уровня печеночных трансаминаз.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

• боррелиоз (Borreliaburgdorferi), моноцитарный эрлихиоз человека (Ehrlichiachaffeensis) и/или анаплазмоз человека (Anaplasmaphagocytophilum).

• Исследование не предназначено для оценки эффективности лечения заболевания.

Источник

Необходимые анализы после укуса клеща

Иксодовые клещи представляют собой паразитов, которые способны жить в разных климатических условиях и при этом весьма успешно находить «хозяина». Они питаются исключительно кровью и могут паразитировать на человеке, а также как на диких, так и на домашних животных. Эти небольшие по своим размерам существа очень опасны — они содержат и переносят возбудителей многих заболеваний, причем как животных, так и человека.

Группа клещевых инфекций, возбудители которых передаются клещами рода Ixodes, включает в себя:

● клещевой энцефалит (вирус клещевого энцефалита)

● иксодовые клещевые боррелиозы (Borrelia burgdorferi sensu lato)

● гранулоцитарный анаплазмоз человека (Anaplasma phagocytophilum)

● моноцитарный эрлихиоз человека (Ehrlihia chaffeensis, Ehrlihia muris) и др.

Вирус клещевого энцефалита

Клещевой энцефалит — вирусное заболевание, возникающее при укусе человека зараженным иксодовых клещей в таежной и лесостепной местности, в весенне-летний сезон.

Клещи заражаются РНК-местным арбовирусы при кровососания больных птиц, грызунов, хищников. Вирус передается человеку при укусе инфицированным клещом. Возможна также передача инфекции при употреблении сырого молока от инфицированных этим вирусом коз и коров.

Больной человек представляет опасность в период виремии (проникновение вируса в кровь), которая длится 7-10 дней . Инкубационный период длится 8-23 дня (в среднем 10-14), но может достигать и 60 дней. Как правило, начало заболевания острое, с лихорадкой и подъемом температуры тела до 38-39 ° С.Вирус клещевого энцефалита, попадая в кровь, проникает в нервную систему, размножается и повреждает нервные клетки, вызывая парезы и параличи.

● вялые параличи и парезы шейно-плечевой мускулатуры (симптом «свеса головы»)

● сильная головная боль

● ригидность мышц затылка, синдром Кернига.

Возможно нарушение сознания. Отношение количества случаев, протекающих без поражения ЦНС тем, которые протекают с поражением ЦНС, оценивается примерно как 3: 1, хотя могут быть региональные различия, связанные с вирулентностью различных штаммов вируса.

Летальность может составлять до 10% . Центрально-Европейский клещевой энцефалит протекает легче азиатского и летальность не превышает 0,5%. Период выздоровления иногда достигает 2 лет. Возможны стертые проявления болезни. После перенесенного заболевания развивается напряженный постинфекционным иммунитет.

Выявление антител IgM к вирусу в сыворотке крови возможно через 10 дней после укуса клеща. Если циркуляция этого вида антител оказывается в острый период, до года и более, то можно предположить персистенцию вируса и хронизации процесса.

Антитела IgG к вирусу свидетельствуют о перенесенном заболевании или эффективную вакцинацию.

Также можно сдать кровь или самого клеща на анализ методом ПЦР.

В всеукраинской сети лабораторий МЕДЛАБ можно сдать такие анализы на клещевой энцефалит:

● 3401 Вирус клещевого энцефалита, антитела IgG, материал — сыворотка крови метод ИФА — качественное исследование.

● 3402 Вирус клещевого энцефалита, антитела IgМ, материал — сыворотка крови метод ИФА — качественное исследование.

● 3455 Вирус клещевого энцефалита (TBEV), материал — клещ / плазма крови, метод ПЦР — качественное исследование.

Показания к назначению анализа:

1. Укус клеща.
2. Через 10 дней после укуса в периферической крови больного обнаружен умеренный лимфоцитарный лейкоцитоз, иногда сдвиг влево с увеличением количества палочкоядерных лейкоцитов, d в лейкоцетарний формуле повышение СОЭ.

Положительный результат:

1. IgM — острая инфекция

2. IgG — перенесенное заболевание или эффективная вакцинация

Отрицательный результат:

1. Инфицирования вирусом клещевого энцефалита не было.
2. Преждевременное проведение исследования (низкий титр антител).

Боррелиоз (болезнь Лайма)

На территории Украины существуют пиродни ячейки особо опасных инфекционных заболеваний, общих для животных и людей, среди которых иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) . Синонимы: болезнь Лайма (ХЛ), Лайм-боррелиоз.

Болезнь Лайма — инфекционное трансмиссивное природно-очаговое заболевание, возбудителями которого являются спирохеты комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, а переносчиками — иксодовые клещи. Сезонность заболевания — апрель-сентябрь.

В результате попадания боррелий в кожу у больных отмечается местное кожное воспаление — клещевая мигрирующая эритема. Но почти у 50% пациентов эритема отсутствует в начале заболевания, это так называемая безеритемна форма

Среди клинических проявлений ИКБ : поражение кожи, нервной системы, опорно-двигательного аппарата, сердца, течение как в манифестной, так и в латентной формах, склонность к рецидивам и хроническое течение. Особое беспокойство вызывает высокий процент поздних поражений различных систем и органов за несвоевременной диагностики, что приводит к хроническим проявлений (3,5-10,6% случаев), длительной нетрудоспособности, инвалидизации, а иногда — и к летальному исходу.

Основной путь передачи инфекции — трансмиссивный, но по данным статистики, только одна из десяти укушенных клещами лиц обращается за медицинской помощью . Больная ИКБ человек не является источником инфекции для окружающих. Алиментарный путь реализуется при употреблении в пищу сырого молока (преимущественно козьего) и других молочных продуктов без термической обработки. Возбудители ИКБ, как и других спирохетозов, могут передаваться трансплацентарно от больной (или инфицированного) женщины к плоду. Риск внутриутробного инфицирования, особенно при своевременном лечении, невелик.

Восприимчивость человека к возбудителю ИКБ достаточно высока и не зависит от пола и возраста . Чаще болеет взрослое трудоспособное население активного возраста (30-59 лет), более 10% от общего количества больных составляют дети. Перенесенное заболевание не дает прижизненного иммунитета. При ИКБ наблюдаются случаи повторного инфицирования через 4-7 лет.

Анализы, которые выполняются в сети лабораторий МЕДЛАБ (сдать на анализ можно и кровь, и самого клеща):

● 3445 Клещевые инфекции, мультиплекс (Tick-borne encephalitis virus (TBEV), B. burgdorferi sl, A. Phagocitophillum, E.chaffencis / E.muris), материал — клещ / плазма крови, метод ПЦР — качественное исследование.

● 3403 боррелии (Borrelia burgdorferi), антитела IgM, материал — сыворотка крови мет от ИФА — качественное исследование.

● 3404 боррелии (Borrelia burgdorferi), антитела IgG, материал — сыворотка крови метод ИФА — качественное исследование.

● 3437 Боррелиоз, антитела IgM к специфическим антигенам Borrelia : VlsE, основная экспрессированных вариабельность белковая последовательность; Р83, белок мембранных везикул; р39, BmpA; р31 OspA, внешний поверхностный белок А; Р30; Р25, OspC, внешний поверхностный белок С; р21; Р19; р17, материал — сыворотка крови метод Western Blot — качественное исследование.

● 3438 Боррелиоз, антитела IgG к специфическим антигенам Borrelia : VlsE, основная экспрессированных вариабельность белковая последовательность; Р83, белок мембранных везикул; р39, BmpA; р31 OspA, внешний поверхностный белок А; Р30; Р25, OspC, внешний поверхностный белок С; р21; Р19; р17, материал — сыворотка крови метод Western Blot — качественное исследование.

● 3454 боррелии (Borrelia burgdorferi sensu lato: B.burgdorferi sensu stricto, B.afzelii, B.garinii), материал — клещ / плазма крови метод ПЦР — качественное исследование.

● 9053 Пакет №53 «Боррелиоз IgM + IgG»: (Антитела IgM к: OspC Bg, OspC Bb, OspC Ba, p39, p41, VlsE Bb; Антитела IgG к: p18, p19, p20, p21, p58, OspC, p39 , p41, p83, LBb, LBa, VlsE Bg, VlsE Bb, VlsE Ba), материал — сыворотка крови метод Western Blot- качественное исследование;

● 3460 Боррелиоз, антитела IgG + IgM LineBlot : (Антитела IgG к специфическим антигенам Borrelia: VlsE Ba: рекомбинантный высокоочищенный антиген VlsE Borrelia afzelii; VlsE Bb: рекомбинантный высокоочищенный антиген VlsE Borrelia burgdoferi; VlsE Bg: рекомбинантный высокоочищенный антиген VlsE Borrelia garinii; LBa: липид Borrelia afzelii; LBb: липид Borrelia burgdoferi; p83 Ba: белок мембранных везикул Borrelia afzelii; p41 Bg: нативный флагелин Borrelia garinii; p39 Bg: нативный BmpA Borrelia garinii; p25: OspC внешний поверхностный белок С Borrelia garinii; Р58; р21; Р19 ; Р18; Антитела IgM к специфическим антигенам Borrelia: VlsE Bb: рекомбинантный высокоочищенный антиген VlsE Borrelia burgdoferi; p41: нативный флагелин Borrelia afzelii; p39: нативный BmpA Borrelia afzelii; p25 Ba: OspC внешний поверхностный белок с Borrelia afzelii; p25 Bb: OspC внешний поверхностный белок С Borrelia burgdoferi; p25 Bg: OspC внешний поверхностный белок С Borrelia garinii) метод Western Blot ;

● 3461 Боррелиоз, антитела IgM к специфическим антигенам Borrelia, LineBlot : VlsE Bb: рекомбинантный высокоочищенный антиген VlsE Borrelia burgdoferi; p41: нативный флагелин Borrelia afzelii; p39: нативный BmpA Borrelia afzelii; p25 Ba: OspC внешний поверхностный белок С Borrelia afzelii; p25 Bb: OspC внешний поверхностный белок С Borrelia burgdoferi; p25 Bg: OspC внешний поверхностный белок С Borrelia garinii; метод Western Blot ;

● 3462 Боррелиоз, антитела IgG к специфическим антигенам Borrelia, LineBlot : VlsE Ba: рекомбинантный высокоочищенный антиген VlsE Borrelia afzelii; VlsE Bb: рекомбинантный высокоочищенный антиген VlsE Borrelia burgdoferi; VlsE Bg: рекомбинантный высокоочищенный антиген VlsE Borrelia garinii; LBa: липид Borrelia afzelii; LBb: липид Borrelia burgdoferi; p83 Ba: белок мембранных везикул Borrelia afzelii; p41 Bg: нативный флагелин Borrelia garinii; p39 Bg: нативный BmpA Borrelia garinii; p25: OspC внешний поверхностный белок С Borrelia garinii; Р58; р21; Р19; Р18; метод Western Blot .

Источник