B burgdorferi sl икб обнаружено что значит у клеща

B burgdorferi sl икб обнаружено что значит у клеща

Выявление возбудителя клещевого боррелиоза (Borrelia burgdorferi), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) боррелий в крови, ликворе.

Синонимы английские

Borrelia burgdorferi sensu lato.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозная кровь, ликвор.

Общая информация об исследовании

Borrelia burgdorferi sensu lato – группа бактерий, состоящая из 10 геновидов, из которых минимум три – Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia garini и Borrelia afzelii – вызывают болезнь Лайма (клещевой боррелиоз). Borrelia имеют форму спирали, крайне подвижны.

Болезнь Лайма – заболевание, передающееся человеку через укус зараженного иксодового клеща и характеризующееся поражением кожи, опорно-двигательного аппарата, нервной и сердечно-сосудистой систем и склонностью к длительному течению. Название оно получило от города Лайм, где была зафиксирована вспышка артритов инфекционной этиологии у детей. Болезнь распространена на территории России, в Америке, Европе, Азии. Природным «резервуаром» боррелий являются животные (млекопитающие и птицы), как правило, дикие. Через зараженную кровь животного боррелия попадает в организм клеща, который является переносчиком болезни. От человека или животного к человеку заболевание не передается. На опасность заражения влияет количество зараженных клещей – в эндемичных районах оно может достигать 40 %. Инкубационный период составляет 3-32 дня. В месте укуса клеща через несколько дней образуется мигрирующая кольцевидная эритема – покраснение кожи, увеличивающееся в размерах, с постепенно светлеющим центром, при этом ощущается зуд или жжение. Кольцевидная эритема – специфический симптом болезни Лайма, облегчающий диагностику, однако у 20-30 % пациентов начало болезни не сопровождается кожными проявлениями. Также отмечаются слабость, повышение температуры, головная боль, увеличение лимфатических узлов.

Следующая фаза болезни – диссеминированная. Из места первичного заражения боррелии разносятся по организму, поражая различные органы. Диссеминированная форма продолжается несколько месяцев и без лечения переходит в персистирующую, которая может длиться годами. При неблагоприятном течении вероятен переход в резидуальную стадию – это необратимые структурные изменения органов.

При клещевом боррелиозе чаще поражаются опорно-двигательная, нервная, сердечно-сосудистая система, глаза, печень, почки, при этом развивается клиническая картина невритов, радикулитов, энцефалитов, артритов, конъюнктивитов, миокардитов, появляется сыпь вне места укуса клеща.

Во время беременности может произойти инфицирование плаценты и самопроизвольное прерывание беременности.

Лечение включает антибиотикотерапию, дезинтоксикацию, назначение противовоспалительных препаратов. Вакцинация против болезни Лайма не проводится.

Диагностика клещевого боррелиоза, особенно диссеминированной и персистирующей форм, представляет некоторые трудности из-за разнообразных клинических проявлений.

Помогает диагностике и позволяет заподозрить клещевой боррелиоз факт укуса, однако часто пациент не знает о нем. Этому способствует то, что переносчиками являются личиночные формы клещей, уступающие по размерам взрослым особям, сам укус безболезнен и, наконец, клещ может укусить в труднодоступное для обзора место (например, в волосистую часть головы).

ПЦР – полимеразно-цепная реакция – выявляет в тканях больных клещевым боррелиозом генетический материал Borrelia burgdorferi sensu lato, отсутствующий у здоровых людей. Это специфичный и быстрый метод диагностики клещевого боррелиоза. ПЦР позволяет поставить диагноз в ранние сроки и назначить подходящее лечение, что помогает предотвратить переход болезни в персистирующую стадию и развитие осложнений. Кроме того, ПЦР дает возможность контролировать эффективность лечения – положительный результат означает наличие возбудителя и необходимость продолжения приема препаратов или его корректировки. Взятие материала непосредственно из пораженного органа позволяет установить роль боррелий в конкретном заболевании. Так, например, у части больных клещевым боррелиозом формируются поражения суставов – артрит – аутоиммунной природы, при этом возбудитель в суставной жидкости отсутствует, что требует иного подхода в лечении по сравнению с инфекционным артритом, вызванным боррелией. Наконец, ПЦР, как исследование, направленное на обнаружение возбудителя в пораженном органе, позволяет правильно поставить диагноз и назначить лечение в ситуации, когда на фоне клещевого боррелиоза развилась другая болезнь, с ним не связанная.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики клещевого боррелиоза у беременной женщины (для своевременного лечения в целях предотвращения осложнений).
• Для дифференциальной диагностики аутоиммунного и инфекционного поражения при симптомах поражения суставов после перенесенного клещевого боррелиоза.
• Чтобы оценить эффективность лечения клещевого боррелиоза.

Когда назначается исследование?

• После укуса клеща при симптомах клещевого боррелиоза (слабость, головная боль, поражение кожи в месте укуса клеща, характерная сыпь).
• При оценке эффективности терапии клещевого боррелиоза.
• При поражениях кожи (кольцевидной эритеме), опорно-двигательного аппарата (артритах), нервной (невритах, радикулитах, энцефалитах), сердечно-сосудистой (миокардитах, эндокардитах) систем для дифференциальной диагностики диссеминированной и персистирующей формы клещевого боррелиоза (болезни Лайма) и поражений другой этиологии.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата

• Клещевой боррелиоз.
• Возможны редкие ложноположительные результаты.

Причины отрицательного результата

• Отсутствие клещевого боррелиоза.
• Возможны редкие ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

Прием антибиотиков (необходимо обсудить с врачом вопрос отмены терапии перед исследованием).

Диагностика персистирующей и диссеминированной форм болезни Лайма, основанная на клинических проявлениях, усложняется со временем, прошедшим от начала болезни, так как поздние симптомы менее специфичны по сравнению с ранними.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, кардиолог, невролог, офтальмолог, ревматолог, акушер-гинеколог, терапевт, гастроэнтеролог, нефролог.

• Королюк А. М., Сбойчакова В. Б. Медицинская микробиология. СПб., 2002.
• Малов В. А., Горобченко А. Н. Иксодовые клещевые боррелиозы (лайм-боррелиоз). М., 2004.
• Манзенюк И. Н., Манзенюк О. Ю. Клещевые боррелиозы (болезнь Лайма). Кольцово, 2005.
• J Clin Invest. 2004 April 15; 113(8): 1093-1101. The emergence of Lyme disease. Allen C. Steere, Jenifer Coburn, and Lisa Glickstein.
• Abstract: Lyme Disease in Pregnancy: Case Report and Review of the Literature. Walsh, Colin A. MB; Mayer, Elizabeth W. MD; Baxi, Laxmi V. MD.
• Sin Hang Lee, Veronica S Vigliotti, Jessica S Vigliotti, William Jones, Jessie Williams, and Jay Walshon. BMC Res Notes. 2010; 3: 273. Early Lyme disease with spirochetemia – diagnosed by DNA sequencing.

Источник

Иксодовые клещевые боррелиозы

Возбудители боррелиозов относятся к порядку Spirochaetales, семейству Spirochaetaceae, роду Borrelia. В группу иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ) входят заболевания, вызываемые в большинстве случаев тремя представителями комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato: B.burgdorferi, B.garinii и B.afzelii. Изучается патогенный потенциал других боррелий комплекса: B.valaisiana, B.lusitaniae, B.bissettii, B.sinica. Ареал распространения этих видов боррелий в основном совпадает с территорией обитания клещей I.persulcatus и I.ricinus, играющих одновременно роль переносчика и резервуара инфекции. Спонтанная инфицированность боррелиями клещей вида:

I. ricinus составляет в среднем 20%, клещей I.persulcatus – 40%. Сезон активности иксодовых клещей начинается в последней декаде апреля и продолжается в средней полосе России до октября, а в Приморье – до ноября. ИКБ распространен в России на 69 административных территориях, наибольшая заболеваемость регистрируется в Кировской, Томской и в последние годы – Вологодской и Ярославской областях. Клинически выраженное заболевание развивается приблизительно в 20% случаев после присасывания инфицированных боррелиями клещей. В результате попадания боррелий в кожу у 50–80% больных отмечается местное кожное воспаление – клещевая мигрирующая эритема, диаметр которой, как правило, превышает 5 см. В 20–50% случаев заболевания эритема отсутствует в начале заболевания и таким образом сразу развивается диссеминированная стадия ИКБ, которая носит название безэритемной формы. В случае гематогенного распространения боррелии поражают внутренние органы, что сопровождается развитием общеинфекционного синдрома и клиническими проявлениями со стороны висцеральных органов (печени, селезенки, сердца, почек). В случае поражения нервной системы возникают менингит (менингоэнцефалит), радикулоневрит, неврит черепных нервов. Наиболее часто поражается VII пара черепных нервов, нередко с парезом лицевых мышц, что является еще одним, кроме эритемы, характерным признаком ИКБ. В ряде случаев, особенно при поздно начатом лечении, заболевание переходит в третью – хроническую – стадию, для которой в настоящее время доказана только одна клиническая форма – хронический атрофический акродерматит. Следует отметить, что у определенной части больных не наступает полное выздоровление в течение длительного времени после острого периода, может до двух лет сохраняться субфебрилитет, длительно – артриты, прогрессирующий энцефаломиелит, энцефалопатии, патологические изменения со стороны сердечно-сосудистой системы.

Показания к обследованию

• Обращение пациента за медицинской помощью с апреля по октябрь;
• факт присасывания клеща или пребывание на природе: в лесной, лесопарковой зоне, в загородных домах и прилегающих к ним территориях;
• развитие общеинфекционного синдрома;
• появление мигрирующей эритемы.

Дифференциальная диагностика. Инфекционные заболевания, передаваемыми иксодовыми клещами; рожистое воспаление; склеродермия; артрит ревматоидный или иной этиологии; миокардит; заболевания ЦНС иного генеза.

Материал для исследований

• Биоптаты кожи – микроскопические исследования, изоляция боррелий культуральным методом, обнаружение ДНК;
• цельная кровь – изоляция боррелий культуральным методом, обнаружение ДНК;
• сыворотка крови – выявление специфических АТ;
• СМЖ – выявление специфических АТ (при развитии серозных менингитов), изоляция боррелий культуральным методом, обнаружение ДНК;
• моча – обнаружение ДНК;
• синовиальная жидкость – выявление специфических АТ (при артритах), изоляция боррелий культуральным методом, обнаружение ДНК.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выявление возбудителя методом микроскопии, изоляцию боррелий с использованием культурального метода, обнаружение ДНК боррелий, выявление специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Обнаружение специфических АТ IgM и IgG – наиболее часто используемый метод лабораторной диагностики ИКБ. Применение РНИФ позволяет обнаружить АТ у 40–50% больных в первые 2–4 недели заболевания, а при исследовании образцов крови в динамике, взятой с интервалом в 1–3 месяца, удается подтвердить ИКБ в 60–70% случаев. Диагностически значимым титром в данной реакции считается положительный результат при разведении сыворотки 1:40, а также четырехкратное нарастание титра АТ во второй из взятых проб относительно первой.

При определении АТ методами ИФА, ИХЛА и т. п. в основном используются несколько (от 4 до 8) рекомбинантных АГ боррелий, относящихся к разным геновидам. Методы обладают большей диагностической чувствительностью в сравнении с РНИФ. АТ IgM начинают обнаруживаться к концу второй недели заболевания, АТ IgG – на 3–4-й неделе заболевания. Обнаружение АТ IgM отмечают у 50% больных с хронической формой ИКБ, что, видимо, связано с изменением антигенных детерминант во время персистенции боррелий в организме больного. Данные о диагностической чувствительности выявления АТ на разных стадиях заболевания приведены в таблице.

Диагностическая чувствительность определения специфических антител при ИКБ

Стадия заболевания	АТ IgM	АТ IgG	АТ IgM+IgG
Острая (I)	45–70%	40–80%	90%
Подострая (II)	30–60%	65–100%	90–100%
Хроническая (III)	5–50%	до 100%	до 100%

При лабораторном подтверждении нейроборрелиоза для определения наличия интратекального синтеза АТ проводится выявление специфических АТ в сыворотке крови и СМЖ. Относительное увеличение концентрации специфических IgG в ЦНС можно определить путем вычисления ликвор-сывороточного индекса (ЛСИ). Для этой цели определяют концентрацию специфических Ig (титр) и общих Ig (г/л) в сыворотке крови и СМЖ.

ЛСИ = (специфические IgG (СМЖ) * общие IgG (сыворотка)) / (общие IgG (СМЖ) * специфические IgG (сыворотка))

Значения ЛСИ больше 2-х расцениваются как положительные и указывают на наличие синтеза специфических иммуноглобулинов клетками глиальной ткани.

Ложноположительные результаты при выявлении АТ методами РНИФ и ИФА могут быть получены у больных с другими спирохетозами: сифилисом и лептоспирозом, у пациентов с ревматоидным артритом неборрелиозной этиологии и другими системными заболеваниями, у пациентов с герпес-вирусной инфекцией, вызванной ЦМВ и вирусом Эпштейн-Барр, а также у беременных.

Для подтверждения специфичности результатов выявления АТ методами РНИФ и ИФА используют метод ИБ, который позволяет обнаружить специфические АТ к определенным белкам возбудителя. В качестве АГ в основном используются рекомбинантные белки p83-100, p58, p41i, p39 (BmpA), OspC (p20-25), p17 (DbpA), BBK32, VlsE, полученные для двух, а иногда и для трех видов боррелий.

Микроскопия (световая, фазовоконтрастная, темнопольная, электронная) биологического материала (СМЖ, кровь, синовиальная жидкость, биоптаты тканей) не имеет широкого применения из-за низкой концентрации возбудителя (в среднем концентрация боррелий в 1 мл биологического материала не превышает 10 000 микробных клеток), за исключением биоптатов кожи. В основном микроскопические исследования используются при контроле культуральных методов и как один из методов при оценке инфицированности боррелиями иксодовых клещей.

При применении для изоляции боррелий культурального метода в качестве среды для культивирования используется модифицированная среда BSK (BarbourStoenner- Kelly). Важным условием является получение образцов биологического материала до начала антибиотикотерапии. Из кожных биоптатов удается изолировать боррелии в 50–60% случаев при наличии клещевой мигрирующей эритемы и в 90% – при хроническом атрофическом акродерматите. При исследовании крови, СМЖ, синовиальной жидкости процент положительных результатов ниже – в среднем 20%. Этот метод не имеет широкого практического применения как диагностический в виду его длительности (от 3–4 до 10 недель) и высокой стоимости.

Выявление ДНК боррелий с использованием молекулярно-биологических методов (преимущественно ПЦР) целесообразно применять в комплексе с выявлением АТ. Прямым показанием для применения ПЦР являются боррелиозные менингиты, менингоэнцефалиты, наличие атипичной эритемы, рефрактерные артриты у пациентов с наличием АТ к боррелиям. Диагностическая чувствительность данного метода составляет от 20 до 35% при исследовании крови в остром периоде на первой неделе заболевания, от 20 до 80% при исследовании синовиальной жидкости при развитии Лайм-артрита и около 10–30% – при исследовании СМЖ при нейроборрелиозе. Метод позволяет также идентифицировать вид боррелий, вызвавших заболевание. Обнаружение ДНК и РНК боррелий методом ПЦР может быть выполнено во всех видах биологического материала (кровь, моча, биоптаты тканей, цереброспинальная и суставная жидкости и др.).

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Обнаружение ДНК патогенных боррелий комплекса B.burgdorferi sl в крови, СМЖ, синовиальной жидкости или моче пациента является основанием для предварительной постановки диагноза ИКБ. Выявление специфических АТ в образцах крови, взятых в динамике (сероконверсия в парных сыворотках крови) служит подтверждением этиологии заболевания.

Интерпретация результатов ИБ в основном сводится к алгоритму, представленному в таблицах .

Оценка результатов при выявлении антител IgM методом иммуноблота

Отрицательный	Положительный	Неопределенный
Не выявлены АТ ни к одному из АГ. Выявлены АТ только к АГ p83-100	Выявлены АТ к белку OspC. Выявлены АТ как минимум к двум АГ из группы: p41, VlsE, p17	Выявлены АТ только к одному АГ из группы p41, VlsE, p17 в сочетании или без АТ к АГ р58, p39, BBK32 или выявлены АТ к любому количеству АГ р58, p39, BBK32

Оценка результатов при выявлении антител IgG методом иммуноблота

Отрицательный	Положительный	Неопределенный
Не выявлены АТ ни к одному из АГ. Выявлены АТ только к АГ p17	Выявлены АТ к белку VlsE. Выявлены АТ как минимум к двум АГ из группы: p83-100, p58, p41, p39, BBK32, OspC, p17	Выявлены АТ только к одному АГ из группы: p83-100, p58, p41, p39, BBK32, OspC

Комплекс антител, выявляемый на разных стадиях

Стадия заболевания	АГ, к которым выявлены АТ IgM	АГ, к которым выявлены АТ IgG
Острая (I)	OspC, p41, p17, VlsE	P41, BBK32, p17, OspC, VlsE
Подострая (II)	OspC, p41, p17, BBK32, VlsE	p17, p41, VlsE, OspC, BBK32, p58
Хроническая (III)	OspC, p41, VlsE, P39, p58	p17, BBK32, p41, p58, VlsE, p83-100, OspC, p39

Определенные сложности использования для диагностики ИКБ методов выявления специфических иммуноглобулинов связаны с присутствием анамнестических АТ у большой части населения, проживающего на эндемичной территории, и низкой скоростью роста уровня АТ, что является особенностью боррелиозной инфекции. Очень медленные изменения уровня АТ к боррелиям (как повышение, так и снижение) также не позволяют использовать оценку уровня АТ для контроля эффективности терапии. Учитывая замедленное образование АТ при боррелиозах, при получении однократного отрицательного результата повторяют исследование в пробе крови, взятой через месяц.

Источник