Диабет у крысы признаки

Сахарный диабет — группа эндокринных заболеваний, развивающихся вследствие относительного или абсолютного недостатка гормона инсулина или нарушения его взаимодействия с клетками организма, в результате чего развивается гипергликемия — стойкое увеличение содержания глюкозы в крови. Заболевание характеризуется хроническим течением и нарушением всех видов обмена веществ: углеводного, жирового, белкового, минерального и водно-солевого.

Ранними признаками сахарного диабета являются:
Полиурия — проявляется учащённым обильным мочеиспусканием. При этом моча на ощупь очень липкая.
Полидипсия — повышенное потребление воды, часто животные практически все свободное время проводят возле миски с водой или другого источника питья.
Полифагия — неутолимый голод.
Похудание — частый симптом диабета, который развивается несмотря на повышенный аппетит.

Диабет бывает инсулинозависимый (1-го типа) и неинсулинозависимый (2-го типа). К 2-му типу относится также стероидный (медикаментозный) диабет (возникает в результате приема ГКС – дексафорт (очень часто!), дексаметазон и т.п.). Главным признаком стероидного диабета является самостоятельное (без применения инсулина) снижение уровня сахара после отмены ГКС.

Норма уровня сахара в крови – 4-9 моль/л. Измеряется с помощью глюкометра, кровь берется из пальца (срезается коготок чуть дальше обычного или прокалывается сосуд инсулиновой иголкой). Возможно измерение сахара в моче с помощью тест-полосок, но это скорее для контроля общего состояния или для предварительной проверки. Сахара в моче быть НЕ ДОЛЖНО. Ни до, ни после, ни во время еды, ни после какого-то продукта питания. Норма — это четкий негатив по глюкозе. Все остальное требует коррекции. Опасен любой уровень сахара, потому что это означает нарушения в обмене веществ. Чем дальше, тем хуже это сказывается на ВСЕХ системах органов.
Лучше использовать тестовые полоски на сахар и кетоны. Например, Diaphan или Кетоглюк-1. Делаете анализ. Достаточно пары капель, там маленькие поля для нанесения мочи. Пометила крыса или написала — прямо в эту лужу и макните полоску, лишнюю мочу слегка стряхните. Через 1 минуту сравниваете цвет поля со шкалой на пенале.
Если показывает глюкозу (и кетоны), колоть физраствор и фуросемид. Физраствор — по 3 мл + 0,05 мл фуросемида — в один шприц (или в разные, тогда разнести на 10 минут). Если через 3 часа тест-анализ опять показывает наличие сахара, вам нужен инсулин. Тут терять уже нечего. Инсулин может крысе помочь, а если поможет, то крыса на инсулине — это лучше, чем совсем без крысы.

Используемые инсулины:
— хумулин регуляр (чел.) — инсулин короткого действия. Если что-то пойдет не так, то он быстро выведется из организма.
— лантус (чел.) — инсулин продленного действия БЕЗ пика действия.
— канинсулин (вет.) – инсулин среднего действия.

Первичная дозировка лантуса/хумулина на крысу 500 г 1/4 от 0,25 ИЕ. То есть набираете 2 ИЕ чистого инсулина, добираете до 1 мл физраствором, ставите из этого коктейля 3-4 ИЕ. На следующий раз дозу постепенно повышаете. Разводите инсулин таким же образом, но ставите уже 6 ИЕ из этого.
Хумулин колоть надо будет до 4-5 раз в сутки, в зависимости от состояния. Лантус или Канинсулин 1-2 раза в сутки, его хватать может и на 20 ч, и на 18.
И дозировки, и период действия инсулина для каждой крысы индивидуален и определяется опытным путем.

После введения инсулина наблюдаете. Проверяете лапы, хвост, смотрите на поведение, не становится ли вялой, сонной. Если что, тормошите, берете в руки, проверяете реакцию мышц, силу сопротивляемости крысы. Через час и далее пару раз берете анализ мочи снова. Главное сейчас — убрать кетоны, если были. Глюкоза снизится, но полоска может и не показать, если изначально зашкаливало.
Первые признаки гипогликемии у крысы: повышение температуры хвоста, лап; вялость, сонливость, постепенная потеря сознания.
То есть в течение минимум часа после введения инсулина наблюдать! Гипогликемия будет видна, как правило, уже в течение первых 15-20 минут, но осторожность не помешает. Иногда это может произойти и через 4-6 часов (в районе пика действия инсулина). С легкой гипогликемией организм справляется самостоятельно, если вовремя подсунуть чего-то сладкого (банан, мёд, зефир и т.п.) и обязательно доступ к воде.
Гипогликемия в серьезной стадии бывает только при сильной передозировке инсулина, тогда это потеря сознания, судороги. Если не принять меры, может наступить кома и смерть. Под рукой обязательно иметь раствор глюкозы, физраствор, фуросемид (лазикс).
Дозировки на крысу грамм 450-500.
В один шприц глюкоза 0,1 мл на 100 грамм, физраствор 1,5-2 кубика и 2 ИЕ фуросемида. Все это вводится под шкуру(холка, бока, попа). В такие моменты животное ничего не чувствует. Надо действовать решительно и не бояться, что крысе может быть больно. Дальше дать покой и ждать. Всё, что можно было сделать, сделали.
В тяжелых случаях, когда дошло до судорог, колют под холку отдельным уколом мексидол 0,5 мл (для защиты мозга). Далее курсом 5 дней, два раза по 0,5 мл.
Примерно через 12 часов после кризиса наступает время очередного укола. Тут надо постараться понять, чего нам надо дальше колоть — инсулин или глюкозу. Тут понадобится глюкометр. Берется кровь на сахар. Если сахар больше 9, то колем инсулин, если меньше 4 — глюкозу. После критических ситуаций обычно дозу снижают на половину ИЕ и продолжают уже с меньшей дозировкой.

Только не надо думать, что с помощью инсулина нормализуются функции внутренних органов, скорее наоборот — приходит конец поджелудочной железе.

Фоспренил снижает сахар (и при диабете 1-го типа, и 2-го ). Нужно поить по 0,5 мл 2р/день.

Диета при диабете
(варианты, описанные разными крысоводами, поэтому в чем-то противоречат друг другу)

1. Самодельная зерновая смесь и много свежего, чтобы сделать в рационе «перекос» с углеводов на растительные белки/жиры. Овощи можно любые, кроме картофеля и кукурузы. Можно сырые, можно тушеные. Топинамбур — ооочень хорошая вещь для диабетика! Из фруктов яблоки любые. Остальные фрукты и ягоды постепенно добавлять, отслеживая реакцию. Можно яйцо вареное, можно мяса кусочек. Почему рекомендуется именно зерновая смесь — чтобы исключить массу нехороших вещей, которые содержатся в промышленных сухих кормах.
2. Из мяса — только нежирную, отваренную без соли курицу. Из фруктов — только несладкие яблоки. Из овощей все, кроме содержащих крахмал (картофель, кукуруза, горошек и т.д.). Кукуруза крайне резко поднимает сахар. Из кормов необходимо вручную выбирать изюм, кукурузу и сушеные фрукты (бананы, цукаты). Гречку отварную давать в очень маленьких количествах. Так же как и молочные продукты — только как лакомство и очень редко.
Можно утром давать крыске салат из четвертинки вареного яичка, мелко нарезанного с огурцами, капустой или салатом ( примерно 1 столовая ложка) и сухой корм без добавок. Вечером такую же порцию того и другого (раза три в неделю).
3. Утреннее и вечернее основное кормление (сырые овощи 3-4 видов, иногда банан/яблоко, чередуются отварная гречка/нежирный домашний творог/отварной коричневый рис/самодельное пюре из тушеных овощей/вареное куриное яйцо),
2-3 перекуса (немного овощей).
В свободном доступе сухой корм: 60% смесь из кукурузных, гороховых, бобовых, овсяных, ячменных хлопьев, 10% сухая гречка, 10% сухой корм для кошек-диабетиков, 10% крекеры из цельного коричневого риса, 10% сухие макароны из цельной непросеянной пшеницы.
Пищевые добавки — инулин и Dialevel (корица, цинк, ALA кислоты), обычный витаминный комплекс.
4. Запаренная гречка.
5. Вместо воды наливать крыске отвары для диабетиков.
6. Брокколи и цветная капуста — доказано, что из овощей достоверно улучшают усвоение инсулина только они.

Внимание! Если после применения отваров и диеты крыска все равно будет пить более чем 30 мл в сутки — необходимо начинать колоть инсулин. Иначе можно посадить почки.

Привести показатели сахара в норму при диабете 2-го типа или разовом скачке помогают:
— растения, улучшающие приток крови к головному мозгу (первоцвет, хвощ, арника, каштан). Они уменьшают дефицит глюкозы в мозговой ткани и, соответственно, снижают уровень сахара;
— травы, улучшающие функцию поджелудочной железы (увеличивающие выработку инсулина), — сбор «Арфазетин», побеги черники, створки фасоли и гороха, корень одуванчика, корень цикория, плоды шелковицы.

При любом типе диабета показано разумное увеличение физической нагрузки. Можно спланировать обстановку в клетке, чтобы максимально увеличить пути перемещения с полки на полку, из одного гамака в другой. Можно разместить кормушку и поилку в разных концах клетки и т.д.

Последний раз редактировалось Iris-Ka 12 дек 2012 14:07, всего редактировалось 1 раз.

Источник

Диабет у крысы признаки

Адаптация животного организма к аллоксановому экспериментальному диабету представляет сложный многоэтапный процесс, главным звеном которого является трансформация клеточного метаболизма. Индукция ферментов глиоксилатного цикла и цикла трикарбоновых кислот в тканях животных обеспечивает изменение основных путей метаболизма, обусловленных ресинтезом гликогена в печени крыс при патологиях, связанных с условиями пищевой депривации и экспериментального диабета [2, 10]. Кроме того, что глюконеогенез выступает как важнейший процесс при адаптивной реакции организма к экстремальным условиям, важную роль играет энергетический обмен, связанный, главным образом с функционированием цикла Кребса. Следовательно, адаптация клеточного метаболизма обеспечивается соотношением интенсивности катаболизма и анаболизма глюкозы в клетках печени и других органов животного организма. Несмотря на значительное количество исследований об интенсивности ферментативной активности, обусловливающей скорость энергетического и синтетического процессов, остаются невыясненными многие факторы регуляции, такие как концентрация метаболитов, воздействие гормонов и другие [4].

В литературе широко представлены работы об особенностях клинико-биохимических показателей при сахарном диабете. Данные морфологических исследований немногочисленны и зачастую разноплановы. В последнее время большое внимание исследователей направлено на изучение состояния нейроэндокринных центров и выяснение их участия в регуляции функций панкреатических островков [5].

Особый интерес вызывает молекулярный уровень регуляции ферментов ЦТК и глиоксилатного цикла, связанный с экспрессионной регуляцией ферментов. Ранее было показано наличие двух изоформ аконитатгидратазы, малатдегидрогеназы. Однако исследований по генетической детерминации изоферментного полиморфизма этих и других ферментных систем в животных организмах в условиях экспериментального диабета нами не обнаружено. В связи с этим целью данной работы являлось комплексное исследование физиолого-биохимических механизмов адаптации крыс при аллоксановом диабете.

Материалы и методы исследования

В качестве объектов исследования служили самцы лабораторных крыс (Rattus rattus L.) массой 200–250 гр., выращенные в виварии при стандартном рационе. Индукцию диабета у исследуемых животных вызывали введением внутрибрюшинно 5 % раствора аллоксана из расчета 100 мг на кг веса животного в 0,9 % растворе NaCI. Контрольные животные выращивались при обычном пищевом режиме, без введения аллоксана.

Для получения ткани печени, почек и поджелудочной железы опытных животных подвергали краниоцервикальной дислокации под эфирным наркозом.

Определение глюкозы производили стандартным глюкозооксидазным методом с помощью глюкометра «Сателлит плюс» (Россия).

Определение активности ферментов проводили при 25 °С с помощью спектрофотометрических методов [4].

Для выделения суммарной клеточной РНК использовался метод фенол-хлороформной экстракции с использованием в качестве осадителя LiCl [9].

Полимеразную цепную реакцию генспецифичными праймерами проводили с помощью набора реактивов AmpliSence (Хеликон, Россия) на приборе Bio-Rad DNA Engine Thermal Cycler Chromo 4 (Bio-Rad, США), используя в качестве красителя SYBR Green. Параметры амплификации: предварительная денатурация 95 °С – 5 мин, затем цикл: 95 °С – 20 с, 58 °С – 30 с, 72 °С – 40 с (детекция), финальная элонгация – 72 °С – 10 мин.

Фиксацию материала осуществляли по методике, предложенной Волковой [1]. Образцы уплотняли для последующей работы на микротоме. Предварительно образцы обезвоживали путем погружения на 24 часа в растворы спиртов разных концентраций. Заливку проводили инкубацией образцов в смесь ксилол-парафин и затем в жидкий парафин на 1–2 ч при 52–56 °С. Срезы приготавливали при помощи микротома 4/MedGV (Micros, Германия) [6]. Окраску препарата проводили с применением гематоксилин-эозина по ранее разработанной методике [8].

Опыты проводили в 3–4-кратной повторности, аналитические определения для каждой пробы осуществляли в трех повторностях [7].

Результаты исследования и их обсуждение

Введение аллоксана подопытным животным способствовало увеличению концентрации глюкозы в крови до 15,8 ммоль/л через 10 дней после инъекции. Проведение данных анализов в динамике в течение 21 дня позволило выявить определенные закономерности. Максимальное значение этого показателя в крови опытных крыс достигало 17,31 ммоль/л. Следовательно, при экспериментальном сахарном диабете происходила мобилизация эндогенных сахаров, которые в печени крысы представлял гликоген.

Анализ полученных данных позволяет выявить определенные тенденции в изменении исследуемых показателей. Так, масса тела контрольных животных увеличивалась в течение всего эксперимента. Ее колебания составляли от 197 г в первый день до 217 г на 21 день. Следовательно, крысы контрольной группы увеличивали свою массу в течение всего опыта на 11,3 %. Противоположная картина обнаружена для данного показателя в экспериментальной группе животных. Динамика изменения массы печени и почек не являлась одинаковой для этих органов. Масса печени, составлявшая 6,49 г в начале опыта у контрольных животных, достигала величины 6,7 г. У экспериментальных животных после введения экзогенного аллоксана масса этого органа уменьшилась с 6,35 до 4,83 г через 21 день экспозиции, что означало 24 %-е снижение массы печени.

Анализ полученных результатов по изменению массы тела и внутренних органов крыс позволяет предположить, что выявленные эффекты связаны с действием экспериментального диабета.

Анализ данных гистологических исследований образцов печени крыс экспериментальной группы свидетельствовал о том, что применение аллоксана вызывало индукцию сахарного диабета, проявляющегося в изменении морфологических особенностей тканей исследуемого органа. В целом при экспериментальном аллоксановом диабете в паренхиме печени исследуемых животных прослеживались выраженные признаки токсического гепатита в виде нарушения балочной структуры долек, некроза гепатоцитов, жировой и белковой дистрофии, наличия инфильтратов из скоплений гематогенных клеток.

Морфологические изменения в ткани поджелудочной железы крыс после введения аллоксана характеризовались наиболее выраженными дегенеративными изменениями в центральных отделах островков Лангерганса (рис. 1). Количество β-клеток в островках резко снижено, в большинстве из них отмечалась вакуолизация цитоплазмы, уменьшение размеров ядер, конденсация хроматина, в некоторых клетках – кариопикноз. Выявлено наличие лимфоцитарного инфильтрата по периферии части островков, отека междольковой соединительной ткани, полнокровие капилляров; в сосудах прослеживались стазы.

а б

Рис. 1. Островковый аппарат поджелудочной железы крысы интактной группы (А) и после введения аллоксана (Б). Окраска гематоксилином-эозином; об. х20

Таким образом, цитотоксическое воздействие аллоксана и инсулиновая недостаточность вызывали патоморфологические изменения в островковой части поджелудочной железы, носящие выраженный деструктивный характер, причем токсическому воздействию в наибольшей степени подвергались β-клетки и компоненты микроциркуляторного русла.

Результаты исследования показали, что в печени крыс с аллоксановым диабетом наблюдается активация маркерного фермента ЦТК – сукцинатдегидрогеназы (СДГ), активность которого увеличилась у опытных животных в 1,77 раза. Увеличение активности сукцинатдегидрогеназы в печени крыс свидетельствует об интенсификации функционирования цикла Кребса в условиях аллоксанового диабета, что, по-видимому, необходимо для энергизации клеточного дыхания и усиления поставок энергетических эквивалентов АТФ, НАДН для адаптации клеточного метаболизма в гепатоцитах.

Активность цитоплазматической формы малатдегидрогеназы (МДГ) в образцах опытных животных составляет 9,38 Е/мг белка, а в контрольных – 4,36 Е/мг белка. Однако иная картина наблюдалась при анализе изменения активности митохондриальной формы малатдегидрогеназы. У крыс в условиях аллоксанового диабета обнаружено резкое увеличение скорости функционирования МДГ в 3,96 раза относительно контрольного варианта.

В наших исследованиях было показано, что активность цитоплазматической аконитатгидратазы (АГ) в опытных образцах по сравнению с контролем уменьшилась в 3,8 раза. Что касается митохондриальной формы, то здесь наблюдается увеличение активности в 3 раза относительно контрольного варианта. В гепатоцитах доминируют реакции синтетического или конструктивного характера, в частности, глюконеогенез, одним из этапов которого является ГЦ. Именно в протекании данного пути принимает участие аконитатгидратаза.

Уровень активности сукцинатдегидрогеназы в исследуемом органе нормальных крыс составлял 0,4 Е/мг белка. У экспериментальных животных поджелудочная железа имела невысокий уровень активности СДГ равный 0,14 Е/мг белка, то есть экспериментальный диабет подавлял функционирование маркерного фермента.

Изменение активности малатдегидрогеназы в разных фракциях клеток поджелудочной железы в контроле и опыте имело определенные тенденции. Уровень активности изучаемого фермента в клетках поджелудочной железы крыс, подвергшихся воздействию аллоксанового диабета, был выше по сравнению с опытными животными.

Уровень активности аконитатгидратазной ферментной системы определяет направление реакций так называемого аконитазного равновесия. Величина аконитазной активности в поджелудочной железе в опытных вариантах возрастала в 2–2,5 раза и составляла значение 0,25 Е/мг белка для цитоплазматической формы и 2,5 Е/мг белка для митохондриального фермента. Следовательно, повышение интенсивности функционирования аконитатгидратазного ферментного комплекса наблюдается как в цитоплазматической фракции, так и в митохондриальной.

Результаты исследования ПЦР-РВ приведены на рис. 2, из которого видно, что в печени крыс при пищевой депривации концентрация транскрипта исследуемого генов МДГ выше такового показателя у контрольных в более чем в 2 раза, что свидетельствует об интенсификации их экспрессии.

Расчетные значения относительной концентрации кДНК гена митохондриальной аконитатгидратазы и сукцинатдегидрогеназы в разных образцах отличаются между собой. Из полученных данных видно, что в печени крыс с аллоксановым диабетом концентрация их транскриптов выше такового показателя у контрольных почти в 3 раза.

Рис. 2. Экспрессия генов малатдегидрогеназы в печени крыс в норме и при аллоксановом диабете. К – контрольные животные, О – животные с аллоксановым диабетом

Данные по экспрессии генов СДГ, МДГ, АГ свидетельствуют, что при диабете активация ферментов происходит на уровне транскрипции соответствующих генов. В условиях аллоксанового диабета наблюдается изменение транскрипционной активности ДНК клеток печени, следовательно, увеличивается скорость экспрессия исследуемых генов.

Использование в нашем исследовании экзогенного аллоксана, вводимого подкожно крысам, позволило создать модель экспериментального диабета у животных. Индукция диабета наблюдалась в течение трехнедельного эксперимента. У опытных животных было выявлено изменение массы тела и внутренних органов, характерное для данного заболевания. Проведенные гистологические исследования тканей печени и поджелудочной железы также свидетельствуют о патологических изменениях у экспериментальных крыс, при этом наибольшее токсическое действие наблюдалось печени исследуемых животных.

Использование методов молекулярной биологии позволило установить, что индукция активности СДГ, АГ и МДГ осуществляется благодаря синтезу de novo. Это вытекает из полученных данных, свидетельствующих о резком повышении уровня экспрессии генов sdha, mdh_mtx и aco, кодирующих эти энзимы.

Таким образом, показано, что адаптация крыс к условиям аллоксанового диабета осуществляется на нескольких уровнях. Патоморфологические изменения в островковой части поджелудочной железы и нарушение балочной структуры долек гепатоцитов сопряжены с трансформацией основных путей клеточного метаболизма, обеспечиваемой изменением функционирования ключевых ферментов цикла Кребса и глиоксилатного пути (СДГ, МДГ и АГ).

Рецензенты:

Свистова И.Д., д.б.н., профессор кафедры биологии растений и животных, ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный педагогический университет», г. Воронеж;

Алабовский В.В., д.м.н., профессор, зав. кафедрой биохимии, ФГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия имени Н.Н. Бурденко», г. Воронеж;

Хисматуллина З.Р., д.б.н., профессор, доцент, заведующая кафедрой морфологии и физиологии человека и животных биологического факультета, ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет», г. Уфа.

Источник