Ферменты печени у крыс

Ферменты печени у крыс

Проблема обморожений является актуальной в травматологии и ортопедии. Одно из центральных звеньев в патогенезе холодовой травмы занимает поражение печени. Поэтому представляет интерес изучить изменение ферментативной активности в печени при обморожениях на примере одного из ключевых ферментов гликолиза, дактатдегидрогеназы.

Цель исследования: Определить активность лактатдегидрогеназы в митохондриях печени у крыс на 3 сутки после холодовой травмы.

Материал и методы: Эксперименты были проведены на 25 белых линейных крысах линии Вистар массой 160-180 г. Под эфирным наркозом животным эпилирована задняя лапа до тазобедренного сустава, затем контактным путем нанесена холодовая травма с помощью сухого льда (твердой углекислоты с температурой -63 о С) циркулярно до границы верхней трети бедра. На 3 сутки подострого эксперимента животные забивались путем декапитации. Митохондрии получали путем дифференциального центрифугирования в градиенте плотности сахарозы (Финдлей, Эванз, 1990). Активность лактатдегидрогеназы определяли по Кочетову (1980). Концентрацию белка определяли по методу Лоури в модификации (Dawson et al., 1984). Результаты исследований обрабатывали с использованием t-критерия Стьюдента с помощью программы BIOSTAT (Гланц, 1998).

Результаты: Полученные результаты показали, что при холодовой травме происходит достоверное увеличение активности лактатдегидрогеназы в прямой реакции в 2 раза. Активность ЛДГпр крыс с обморожением составила 100,95+2,32 нмоль НАДН/мин*мг белка, активность ЛДГ пр интактных крыс равна 58,62+2,41. При этом под воздействием холодовой травмы не наблюдалось достоверного увеличения активности лактатдегидрогеназы в обратной реакции. Активность ЛДГобр крыс с обморожением равна 304,72+23,34 нмоль НАДН/мин*мг белка, активность ЛДГ в обратной реакции интактных крыс — соответственно 238,07+12,08 нмоль НАДН/мин*мг белка. Достоверное увеличение активности лактатдегидрогеназы в прямой реакции, при незначительном увеличении активности ЛДГ в обратной реакции приводит к увеличению количества пировиноградной кислоты, что свидетельствует об ингибировании процессов анаэробного гликолиза. Активированию прямой лактатдегидрогеназной реакции способствует сдвиг соотношения окисленных и восстановленных форм НАД в сторону преобладания первых.

Заключение: Таким образом, изменение активности лактатдегидрогеназы митохондрий печени под воздействием холодового фактора может привести к нарушению течения гликолиза и многих сопряженных с ним реакций обмена веществ.

Источник

Печеночные ферменты

Печеночные ферменты – это важнейшие компоненты большинства биохимических реакций, протекающих в организме человека. Уровень каждого из ферментов может с высокой степенью точности указывать на развитие патологического процесса как в самой печени, так и в других системах и органах.

Виды печеночных ферментов

Все ферменты печени можно разделить на три большие группы.

Экскреторные. Эти ферменты синтезируются преимущественно в самой печени и выводятся из нее вместе с желчью. При оценке уровня секреторных ферментов, в частности щелочной фосфатазы, можно проверить качество секреции желчи и функции желчного пузыря и желчевыводящих протоков.

Секреторные. Ферменты этой группы вырабатываются в печени, но выделяются в плазму крови, в которой начинают выполнять определенные функции. Так, уровень протромбиназы и холинэстеразы в крови важен для поддержания правильных показателей свертываемости крови.

Индикаторные. Такие ферменты вырабатываются или выделяются в кровь только при определенных обстоятельствах. Это делает их незаменимыми при диагностике ряда заболеваний. Так, уровень аспартатаминотрансферазы (АсАТ), аланинаминотрансферазы (АлАТ), гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и пр. и их соотношение важны для оценки степени поражения тканей печени воспалительным или инфекционным процессом, служат ценным диагностическим критерием для выявления скрытых кровотечений, инфаркта и пр.

Уровень печеночных ферментов может варьироваться при определенных обстоятельствах. Так, незначительное их повышение наблюдается при длительном курсе лечения некоторыми лекарственными препаратами, после употребления алкоголя, при преимущественно жирной пище в рационе и пр.

Уровень печеночных ферментов и их соотношение в крови исследуются лабораторными методами, после чего врач определяет дальнейшее направление диагностики.

Фосфоглив* —

1. Настоящая информация основана на исследованиях, проводимых ООО «Ипсос Комкон», и действительна по состоянию на декабрь 2016 года

2. Распоряжение правительства РФ от 28 декабря 2016 г. № 2885-р «Об утверждении перечней жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов для медицинского применения на 2017 год»

3. Ивашкин В.Т., Бакулин И.Г., Богомолов П.О., Мациевич М.В. и др., 2017 г.

4. Бакулин И.Г., Бохан Н.А., Богомолов П.О., Гейвандова Н.И. и др., 2017 г.

5. Буеверов А.О., 2014 г.

6. Филимонкова Н.Н., Воробьева Ю.В., Топычканова Е.П., 2013 г.

7. Новикова Т.И., Новиков В.С., 2011 г.

8. Приказ МЗ РФ от 10.11.2011 г. № 1340н «Об утверждении Перечня лекарственных средств, отпускаемых по рецептам врача (фельдшера) при оказании дополнительной бесплатной медицинской помощи отдельным категориям граждан, имеющим право на получение государственной социальной помощи»

9. Приказ Минздрава РФ от 09.11.2012 N 772н «Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи при других заболеваниях печени»

10. Инструкция по медицинскому применению

11. И.Г. Никитин, И.Е. Байкова, В.М. Волынкина и соавторы, 2009г.

12. Ивашкин В.Т., Драпкина О.М., Маев И.В. и др. Распространенность неалкогольной жировой болезни печени у пациентов амбулаторно-поликлинической практики в Российской Федерации: результаты исследования DIREG 2 //РЖГГК. – 2015. — № 6. – С. 31-41

Источник

Крысы-алкоголики подсказали ученым, как можно лечить печень

Российские ученые обнаружили в печени крыс с хроническим алкоголизмом особую систему митохондрий, которая меняется под действием этанола. Это может пригодиться для разработки новой терапии при алкогольной интоксикации.

Как проходило исследование

Ученые разделили на пары самцов крыс одного возраста и веса, которых содержали в отдельных клетках, оборудованных специальными поилками. Грызуны, получавшие алкогольную диету, имели свободный доступ к поилкам в течение дня; контрольные крысы получали точно такое же количество еды, что и «выпивающие» собратья.

Животным из первой группы постепенно увеличивали количество этанола с пищей, а затем давали корм, содержащий 5% этанола. После этого исследователи выделяли митохондрии из печени крыс и изучали различия в их состоянии контрольной и алкогольной групп.

Что такое митохондрии

Митохондрии — особые компоненты, которые играют важную роль в жизненном цикле клеток организма. Они участвуют в обмене веществ и энергии, встречаясь в клетках разных органов. К примеру, большое количество митохондрий функционирует в клетках печени, которые обладают высокой регенеративной способностью и требуют много энергетических затрат.

Что открыли ученые

Исследуя воздействие этанола на организм крыс, ученые также исследовали реакции на добавки препаратов, потенциально полезных для лечения последствий алкоголизма. Оказалось, что два вещества — PK 11195 и Протопорфирин-IX способны специфически связываться с активным центром белка, который находится на внешней мембране митохондрий и отвечает за перенос холестерина с внешней мембраны на внутреннюю.

Эти вещества показывали эффективность в исследованиях различных заболеваний, в том числе онкологических, и входят в состав некоторых фармацевтических препаратов, но для лечения последствий алкогольной интоксикации до сих пор не применялись.

«Мы обнаружили значительное усиление действия данных препаратов в митохондриях, выделенных из крыс с хроническим алкоголизмом, — говорит старший научный сотрудник лаборатории фармакологической регуляции клеточной резистентности Института теоретической и экспериментальной биофизики РАН Юлия Бабурина. — Например, при добавлении Протопорфирина в митохондриях пристрастившихся к спиртному крыс дыхание не угнеталось, а набухание митохондрий замедлялось».

Ученые предположили, что в митохондриях есть особая система, действующая при возникновении патологий, связанных с алкоголизмом. Протопорфирин и PK 11195 участвуют в регуляции этой системы.

Почему это важно

По словам Юлии Бабуриной, изучение механизма действия веществ станет предметом дальнейших исследований. Уже сейчас результаты работы ученых открывают перспективы применения Протопорфирина IX и PK 11195 для лечения заболеваний, связанных с хронической алкогольной интоксикацией.

Источник

Ферменты печени у крыс

Критерием оценки выраженности гипоксии мо­жет служить уровень активности сукцинатдегидроге­назы (СДГ) и цитохромоксидазы (ЦХО) [А.А. Корнев, И.А. Комиссарова, 1994; Л.Д. Лукьянова, 2000]

СДГ в значительной мере определяет скорость потребления кислорода и образования АТФ в дыха­тельной цепи. ЦХО — конечный компонент цепи дыха­тельных ферментов, переносящий электроны от цито­хрома на молекулярный кислород, катализирует более 95% утилизации клеточного кислорода.

Целью работы явилось изучение активности СДГ и ЦХО в ткани печени в условиях острой циркуля­торной гипоксии.

Для достижения поставленной цели были ре­шены следующие задачи:

• получена модель острой циркуляторной гипок­сии у крыс;
• определен уровень активности СДГ и ЦХО в печени крыс в условиях циркуляторной гипоксии.

Опыты проводились на беспородных белых кры­сах самцах массой 180 — 220 грамм, содержавшихся в стандартных условиях вивария. Циркуляторную ги­поксию вызывали кровопотерей по Saperstein, 1960. Уровень активности ферментов определяли в печени крыс через три и семь часов после кровопотери (пер­вая и вторая экспериментальные группы). В ткани печени определяли активность СДГ (Slater, 1959) и активность ЦХО (Vernon 1964). Получены данные представлены в таблице.

Таблица. Активность ЦХО и СДГ в ткани печени крыс в условиях острой циркуляторной гипоксии

Источник

Ферменты печени у крыс

Содержание микроэлементов (МЭ) в здоровом организме, его органах и тканях поддерживается в определенных границах. Баланс МЭ обусловлен их важной ролью в процессах жизнедеятельности. Они участвуют в многочисленных процессах комплексообразования с природными лигандами, такими как нуклеиновые кислоты, углеводы, пептиды, белки, витамины, гормоны, и обеспечивают их биологические функции [6]. Нарушения баланса МЭ в организме играют значимую роль в этиологии и патогенезе многих заболеваний [2]. Показана важная роль МЭ в развитии сахарного диабета [15], особенно второго типа [9, 14], и нарушений толерантности к глюкозе [14]. Особый интерес к МЭ при сахарном диабете обусловлен применением МЭ для разработки новых методов лечения сахарного диабета [15]. Значимость МЭ в патогенезе сахарного диабета и его осложнений обусловлена антиоксидантными свойствами, которые МЭ проявляют в связанном с ферментами системы антиоксидантной защиты виде [8, 13, 15]. Такая взаимосвязь антиоксидантного и микроэлементого статусов важна для понимания роли МЭ в патогенезе различных заболеваний [4], поскольку по современным представлениям именно окислительный стресс играет ключевую роль в развитии патологических процессов в организме [3].

Нарушения баланса МЭ при сахарном диабете проявляются в разнонаправленных изменениях содержания отдельных МЭ в крови и тканях [10, 14]. Это позволяет предположить связь изменений содержания МЭ либо с тяжестью заболевания, либо с действием каких-либо дополнительных факторов. В качестве таких модифицирующих микроэлементный баланс факторов при диабете могут выступать сочетанные патологические процессы, например воспаление. Хорошо известна высокая подверженность больных сахарным диабетом инфекционным и неинфекционным воспалительным заболеваниям.

Цель исследования: изучить содержание микроэлементов — меди, цинка, марганца, молибдена, в тканях печени и легкого крыс с аллоксановым диабетом после индукции воспаления внутривенным введением микрочастиц SiO₂.

Материал и методы исследования

Работу проводили на половозрелых крысах-самцах породы Вистар. Животных содержали в одиночных клетках на стандартных кормах и со свободным доступом к воде. Во время эксперимента крыс разделили на 4 группы — контрольную и три подопытные. В контрольной группе были интактные животные. У крыс 1-й подопытной группы вызвали аллоксановый диабет путем однократного внутрибрюшинного введения раствора аллоксана, разведенного в 0,85 % водном растворе NaCl, в дозе 17 мг/100 г массы тела. Крысам 2-й подопытной группы однократно в хвостовую вену ввели суспензию микрочастиц диоксида кремния (SiO₂) марки «S-563» (Sigma) с размером 1-5 мкм в 0,85 % водном растворе NaCl в дозе 10 мг/100 г массы тела, моделируя тем самым гранулематозное воспаление [7]. Крысам 3-й подопытной группы суспензию микрочастиц SiO₂ ввели через 8 суток после введения аллоксана на фоне развившегося заболевания. Животных 1-й группы вывели из эксперимента через 9 суток после введения аллоксана, животных 2-й и 3-й групп — через 1 и 4 суток после введения микрочастиц SiO₂. На всех сроках наблюдения в группах было по 5 животных. Формирование аллоксанового диабета у крыс подтверждали измерением в сыворотке крови содержания глюкозы ферментативным методом с использованием наборов «GLU» фирмы «BioCon». Ткань печени и легкого (по 1 г) забирали в пластиковые чашки Петри, высушивали до постоянного веса в термостате при 40 °С и хранили в пластиковых контейнерах. Содержание кремния (Si), цинка (Zn), меди (Cu), марганца (Mn) и молибдена (Mo) в высушенных образцах определяли методом атомно-эмиссионной спектрометрии с возбуждением спектров в двухструйной дуговой плазме высокой мощности. Метод не требует предварительного растворения образца, что минимизирует потери элементов и риск загрязнения пробы. Результаты выражали в мкг МЭ на 1 г сухого веса ткани.

Статистическую обработку результатов проводили методом дисперсионного анализа с использованием критерия Краскела-Уоллиса для множественных и непараметрического критерия Манна-Уитни для парных сравнений. Вероятность справедливости нулевой гипотезы принимали при 5 % уровне значимости (р * — р

Источник