Способ проведения наркоза у крыс при многоэтапном эксперименте при моделировании эндометриоза
Владельцы патента RU 2466753:
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при проведении многоэтапного эксперимента по моделированию эндометриоза. Для этого осуществляют премедикацию ксилазином. Для проведения основного наркоза внутримышечно вводят препарат «Zoletil 50» в дозе 0,5 мг/кг массы тела крысы. Способ обеспечивает адекватную анестезию при одновременном сокращении времени выхода крысы из наркоза, что снижает вероятность развития послеоперационных осложнений. 1 пр.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при проведении экспериментальных исследований для введения в наркоз.
Известны способы введения в наркоз экспериментальных животных с помощью наркотических анальгетиков (морфин, промедол), нейролептиков (дроперидол), антигистаминных веществ (димедрол, супрастин), холинолитиков (атропин), применяемых в дозах: морфин 0,5 мл/кг массы тела 1% раствора; дроперидол — 0,5 мг/кг массы тела 0,25% раствора; димедрол 1,5 мг/кг массы тела 1% раствора; атропин 0,0001 /10 кг/ массы тела 0,1% раствора (Шалимов С.А., Радзиховский А.П., Кейсевич Л.В. Руководство по экспериментальной хирургии, — М.: Медицина, 1989, с.153-156. С.А.Шалимов, В.П.Радзиховский, Л.В.Кейсевич «Руководство по экспериментальной хирургии». М.: Медицина, 1989 г. Р.С.Сатоскар, С.Д.Бандаркар, «Фармакология и фармакотерапия», М.: Медицина, 1986, И.С.Чекман, А.П.Пелещук, О.А.Пятак «Справочник по клинической фармакологии и фармакотерапии. «Киев, «Здоров’я» 1986 г.).
Однако применяемые для введения в наркоз лекарственные препараты и их сочетания обладают рядом недостатков, а именно: угнетают дыхание и иногда вызывают его остановку до развития хирургического наркоза; вызывают угнетение сосудодвигательного центра и замедляют выход из наркоза, т.к. их клинические эффекты продолжаются в течение 3-6 часов; усиливают рвотный рефлекс и обладают антидиуретическими свойствами; являются строго учетными препаратами, что ограничивает их применение; несовместимы с барбитуратами из-за резкого нарушения дыхания; способствуют у собак дегидратации, развитию метаболического ацидоза, нестабильности гемодинамики с наклонностью к гипотонии (С.А.Шалимов, А.П.Радзиховский, Л.В.Кейсевич «Руководство по экспериментальной хирургии». — М.: Медицина, 1989 г.).
В физиологическом эксперименте на животных широко применяется более длительный внутривенный наркоз (хлоралоза, нумал, диал). Эти вещества, имеющие различный химический состав, действуют в течение нескольких часов и позволяют производить длительные операции и многочасовые исследования на живом организме. Особенно широко применяется в опытах на животных хлоралоза (или хлоралозан) (Кассиль Г.Н. Наука о боли. — М.: Медицина, 1975). Недостатками такого наркоза являются трудность попадания в вену экспериментальных животных с весом (например, крысам с живым весом 150-200 г), длительный выход из наркоза, повышающий вероятность тяжелых осложнений, приводящих к летальному исходу и т.д.
Известен способ проведения наркоза в эксперименте на животных, заключающийся в проведении премедикации, вводного и основного наркоза, при этом экспериментальному животному последовательно, с интервалом 3-4 минуты, внутримышечно вводят лекарственную смесь следующего состава: дроперидол, димедрол, атропин, кеталар в терапевтических дозах; затем внутримышечно реланиум в дозе 0,002-0,005 мг/кг массы тела, 100 мг Трамала, после чего внутриплеврально последовательно, с интервалом 3-4 минуты вводят кеталар в дозе 1-2 мг/кг массы тела и 5% раствор Тиопентал-Na в дозе 3-5 мг/кг массы тела (Пат. №2072872 РФ. МПК 6 A61M 21/00. (Способ проведения неингаляционного наркоза в эксперименте на животных. / Дмитриев О.В. Опубл. 10.02.1997 г.). Недостатки данного способа: необходимость применения большого числа препаратов, отрицательное воздействие барбитуратов на организм. Тиопентал натрия — препарат барбитурового ряда — обладает высокой токсичностью и оказывают прямое депрессорное влияние на дыхательный центр и сердечно-сосудистую систему. Степень этих изменений возрастает по мере углубления наркоза (Бунятян А.А. Справочник по анестезиологии и реаниматологии, М., 1982, с.150).
Известно применение препарата «Zoletil 50» для проведения общей анестезии с премедикацией препаратами-ваголитиками (атропин), это связано с необходимостью блокировать влияние блуждающего нерва на сердечно-сосудистую систему, иначе при операциях (особенно полостных) есть риск перераздражения вагуса, что может привести к остановке сердца. При использовании препарата «Zoletil 50» также рекомендуется использовать атропин в дозе 0,04 мг/кг. Недостатки данного способа: при передозировке атропина могут наблюдаться различные неврологические и соматические расстройства. При внутривенном введении атропина может возникнуть фибрилляция желудочков сердца. (Инструкция к препарату «Zoletil 50»). Известно также применение препарата «Zoletil 50» с премедикацией ксилазином. Ксилазин (препарат Ксила в 1 мл раствора содержит ксилазина гидрохлорида 20 мг) обладает потенциальным анальгетическим эффектом, за которым следует доминантный седативный эффект. В зависимости от дозы он вызывает угнетение ЦНС, снижает двигательную активность и часто, в первые несколько минут, наблюдается атаксия. Препарат обладает успокаивающим, болеутоляющим, анестезирующим и миорелаксационным действием. В качестве премедикации перед наркозом ксилазин снимает мышечное напряжение, а за счет седативного действия смягчает выход из наркоза.
«Zoletil 50» — препарат для общей анестезии, содержащий в качестве действующих веществ тилетамина гидрохлорид и золазепама гидрохлорид (125 мг тилетамина гидрохлорида и 125 мг золазепама гидрохлорида). Тилетамин — общий анестетик диссоциативного действия, вызывающий выраженный анальгетический эффект, но недостаточное расслабление мышц. Тилетамин не подавляет глоточный, гортанный, кашлевой рефлексы, не угнетает дыхательную систему. Золазепам угнетает подкорковые области мозга, вызывая анксиолитическое и седативное действия, расслабляет поперечно-полосатую мускулатуру. Золазепам усиливает анестетическое действие тилетамина. Он также предотвращает судороги, вызванные тилетамином, улучшает мышечную релаксацию и ускоряет восстановление после наркоза. «Zoletil 50» — это последнее поколение диссоциативов, он разрешен к применению на территории Российской Федерации и не внесен в список сильнодействующих и психотропных препаратов ввиду отсутствия психотропного эффекта, что позволяет применять препарат «Zoletil 50» в ветеринарии абсолютно легально. «Zoletil 50» не снижает температуру тела, не вызывает кардиореспираторной депрессии и не оказывает токсического влияния на печень и почки, сохраняя при этом ларингеальный, фарингеальный и пальпебральный (моргательный) рефлексы, может использоваться у беременных и новорожденных животных. «Zoletil 50» можно комбинировать с ксилазином. В связи с тем что «Zoletil 50» обладает выраженным анальгетическим эффектом при применении субнаркотических доз, ксилазин необходим как миорелаксант, чтобы достичь достаточной глубины наркоза. Комбинация ксилазин — «Zoletil 50» является синергичной. При комбинированном наркозе с использованием «Zoletil 50» и ксилазина рекомедуются следующие дозировки для собак и кошек: ксилазин 0,05 мл/кг при в/м и в/в применении однократно «Zoletil 50» 1-2 мг/кг (Инструкция к препарату «Zoletil 50»). Дозировки для животных с низкой массой тела не указаны. Этот способ выбран за прототип. Недостатками его являются недостаточно быстрый выход из наркоза (3-4 часа) лабораторных животных — крыс-самок, увеличивается риск осложнений в послеоперационном периоде по типу пневмоний, что может закончиться летальным исходом и потерей лабораторного животного для дальнейшего проведения эксперимента при моделировании эндометриоза.
Задачей изобретения является повышение выживаемости лабораторных животных — крыс в условиях длительного многоэтапного эксперимента при моделировании эндометриоза.
Технический результат заключается в сокращении времени выхода из наркоза лабораторного животного — крысы, что снижает вероятность развития послеоперационных осложнений при моделировании эндометриоза.
Это достигается за счет того, что препарат «Zoletil 50» вводят в дозе 0,5 мг/кг массы тела крысы.
На кафедре репродуктивной медицины и хирургии ФПДО ГОУВПО «Московского государственного медико-стоматологического университета Минздравсоцразвития РФ» проводились исследования по созданию модели экспериментального эндометриоза. Заболевание моделировали аутотрансплантацией (эндометрием внутрь перитонеума) одного фрагмента эндометрия с миометрием (3×3 мм), полученного из левого рога матки, к поверхности брюшины передней брюшной стенки. Все эксперименты проводили в соответствии с требованиями Женевской Конвенции «International Guiding Principles for Biomedical Research Involving Animals» (Geneva, 1990).
В ходе эксперимента применялся наркоз по способу-прототипу: для премедикации каждой крысе-самке вводили внутримышечно ксилазин в дозе, рассчитанной по инструкции в соответствии с весом животного, затем через 10 мин вводили «Zoletil 50», также в дозе, рассчитанной по инструкции. Однако за время выхода из наркоза, составляющее 3-4 часа, у крыс-самок в 5-10% случаев развивалась пневмония и животные погибали, что отрицательно сказывалось на получении статистически достоверных данных при мониторинге за очагом эндометриоза. Опытным путем, постепенно снижая дозу вводимого «Zoletil 50» и доведя ее до половинной по сравнению с исходной, равной 1 мг/кг массы тела, при этом длительность наркоза составляла 35-40 мин, что было достаточно для проведения операции по моделированию экспериментального эндометриоза. Был достигнут результат, при котором время выхода из наркоза сократилось вдвое, а выживаемость лабораторных животных — крыс-самок — стала практически 100%-ной на протяжении всего многоэтапного эксперимента при моделировании эндометриоза: после операции животные содержались в виварии в течение 4 недель для приживления имплантов, после чего производили измерение размеров и морфологическую оценку полученных имплантов, кроме того, животному выполнялось не одно, а два или три чревосечения, что важно для мониторинга за очагом эндометриоза под воздействием различных апробируемых лечебных факторов в эксперименте.
Способ осуществляется следующим образом:
за 15 мин до основного наркоза с целью премедикации крысе внутримышечно вводят ксилазин (препарат Ксила) в дозе 0,05 мл/кг массы тела (по инструкции), затем через 10 мин вводят «Zoletil 50» в дозе 0,5 мг/кг массы тела.
За 15 минут до основного наркоза крысе-самке линии Вистар (разводки питомника «Столбовая») весом 210 граммов, находящейся в фазе проэструса, внутримышечно ввели ксилазин (препарат Ксила) в дозе 0,01 мл, а через 10 мин после премедикации ввели «Zoletil 50» в дозе 0,105 мг. Длительность наркоза составила 35 минут. Выход животного из наркоза — 98 минут. После операции крыса содержалась в виварии в условиях регулируемого светового дня (12×12 часов) и постоянной комнатной температуры (23±2°C) на стандартном пищевом рационе и свободном доступе к воде в течение 4 недель для приживления имплантов, в ходе дальнейшего эксперимента животному произвели еще 2 чревосечения. После проведенных операций лабораторное животное осталось живо.
Способ проведения наркоза у крыс при многоэтапном эксперименте при моделировании эндометриоза, включающий проведение премедикации ксилазином и основного наркоза препаратом «Zoletil 50» внутримышечно, отличающийся тем, что препарат «Zoletil 50» вводят в дозе 0,5 мг/кг массы тела крысы.
Источник
группа компаний «ВИВАРИЙ»
АНЕСТЕЗИЯ ГРЫЗУНОВ. ЧАСТЬ 2.
Выбор наркозной системы (часть наркозного аппарата) зависит от размера тела животного и типа используемого оборудования. Все наркозно-дыхательные системы должны обеспечивать подачу достаточного количества газообразного анестетика и кислорода для достижения соответствующих параметров вентиляции для животного и удаление отработанных газов, содержащих диоксид углерода. Если отработанные газы не удалять, то они снова попадут в дыхательные пути животного, но в смеси будет содержаться недостаточное количество кислорода для поддержания жизненно важных функций организма.
Модифицированный контур Бэйна
Также имеется возможность проведения вентиляции у мышей и крыс через эндотрахеальную трубку, хотя для этого требуется большой опыт и наличие дополнительного специального оборудования. Преимущество установки эндотрахеальной трубки заключается в том, что анестетик попадает непосредственно в легкие, поэтому для проведения наркоза требуется меньшая его концентрация; обеспечивается возможность проведения искусственной вентиляции легких животному при остановке дыхания; обеспечивает защита дыхательных путей от попадания жидкости.
Краткое описание техники проведения ингаляционной анестезии
Поддержание анестезии:
После индукции:
• Животное укладывают на теплую поверхность
• На глаза наносится смазка
• На рот и нос накладывается маска
• Начинается подача газового анестетика и кислорода для поддержания анестезии (у грызунов часто используется модифицированный контур Бэйна)
• Чтобы убедиться в достаточной глубине анестезии для проведения процедуры производится проверка рефлексов
• На всем протяжении наркоза осуществляется контроль жизненно важных показателей.
Используемые препараты
Наиболее часто в качестве анестетика у крыс и мышей используется изофлюран.
Стадии наркоза
На различных стадиях наркоза наблюдаются следующие признаки:
| Хвост и голова опущены, двигательная активность замедляется и останавливается, но сохраняется незатрудненное дыхание Отсутствие установочного рефлекса, отмечается заметная реакция на болевые раздражители Отсутствует сгибательный рефлекс и реакция на защипывание хвоста, снижение/отсутствие тонуса мышц конечностей, замедленный ровный ритм сердечных сокращений и дыхания Глубокое нерегулярное дыхание, цианоз (синюшность) подушек стоп, ушей, хвоста, зрачки не реагируют на свет, замедленное нерегулярное биение сердца Наркоз – это неестественное состояние, т.е. животное не просто спит, и каждый должен это понимать. Степень сопутствующего риска зависит от состояния здоровья животного, опыта хирурга/анестезиолога и имеющегося оснащения. МОНИТОРИНГ Грязный вид из-за недостаточного ухода за шерстью; передвижение с неохотой; хромота; нахождение в углу клетки в стороне от остальных животных Более или менее смирное или агрессивное Трясет или царапает определенную область тела; гиперактивность, бег по кругу, подергивания кожи Снижение приема пищи и/или воды Горбится (боль в животе); стоит с разведенными передними лапами (боль в груди) Чрезмерное вылизывание или жевание конечностей Нарушение дефекации или мочеиспускания Запор; уплотнение стула; учащение или урежение мочеиспускания; недержание мочи Взъерошенная шерсть; помутнение глаз ХОРОШИЙ УХОД ИМЕЕТ ВАЖНОЕ ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ ОБЕСПЕЧЕНИЯ ХОРОШЕЙ ВЫЖИВАЕМОСТИ В ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОМ ПЕРИОДЕ. Источник |