Препарат вилочковой железы крысы
Введение. Известно, что тимус – орган, подверженный выраженным возрастным инволютивным изменениям, а также острой акцидентальной атрофии различной этиологии. Биологическое старение сопровождается угнетением многих звеньев иммунитета, при этом страдают как клеточный, так и гуморальный иммунный ответ [9]. В настоящее время снижение иммунной реактивности организма вследствие старения считается одной из причин более высокой заболеваемости раком у лиц пожилого возраста [6]. Есть мнение, что одной из причин снижения противоопухолевой резистентности может являться возрастная инволюция вилочковой железы [7].
Расширение знаний о значении тимуса и динамике его морфологических изменений при разных патологических состояниях показали возможную обратимость его инволютивной перестройки [11]. Одним из примеров обратимости инволютивных изменений тимуса является беременность, при которой в железе наблюдаются явления акцидентальной атрофии. Эти признаки развиваются на фоне повышенного уровня гормонов и полностью компенсируются после завершения лактации [5].
Перспективным направлением для исследования внутритимических механизмов возрастной индуцированной атрофии тимуса является изучение нарушений перекрестных взаимодействий между развивающимися тимоцитами и поддерживающей стромой коркового и мозгового вещества долек [4; 8; 10]. В этой связи особый интерес представляет исследование возможности регулирования цитокинового профиля тимопоэтического компонента железы. Одним из соединений, обладающим иммуномодулирующим влиянием на продукцию цитокинов антигенпрезентирующими клетками, является отечественный синтетический препарат полиоксидоний. В наших предыдущих работах было установлено, что курсовое введение полиоксидония сопровождается признаками, указывающими на стимуляцию тимопоэза и повышение функциональной активности тимуса непосредственно после окончания курсового воздействия [1; 3]. В этой связи интерес представляет определение длительности этого эффекта и его возможного влияния на течение возрастных инволютивных изменений тимуса в динамике.
Цель исследования – изучение морфологии и молекулярного фенотипа тимуса через один, три и пять месяцев после курсового введения иммуномодулятора полиоксидоний в сравнении с изменениями при возрастной инволюции.
Материалы и методы исследования. Работа выполнена на 60 белых нелинейных крысах-самцах 5 месяцев массой 180-220 грамм. Уход и содержание животных проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». Животные были разделены на две группы. Животным первой группы (30 крыс) внутримышечно вводили раствор полиоксидония из расчета 0,1мг/кг 2 раза в неделю в течение 3-х недель. Способ введения и доза рассчитывались исходя из средней терапевтической дозы препарата для человека. Животные второй группы – интактные (30 крыс), служили для определения возрастных инволютивных изменений и контроля. Выведение из эксперимента животных опытной группы проводилось через 30, 90 и 150 суток после окончания введения полиоксидония путем декапитации. Одновременно выводились интактные животные соответствующего возраста. Объектом исследования служил тимус. В работе применялись следующие методы.
1. Иммуногистохимический метод с использованием пяти коммерческих моноклональных (МАКАТ) и поликлональных (ПКАТ) антител фирм Santa Cruze (США) и NovoCastra (Великобритания):
Материал для исследования методом иммуногистохимии фиксировали 10%-ным нейтральным забуференным формалином в течение 24 ч, выполняли стандартную спиртово-ксилоловую проводку. Подготовленные образцы тканей заливали в парафин, готовили срезы толщиной 4 мкм, которые наносили на высокоадгезивные стекла и высушивали при температуре 37 °С в течение 18 ч. Демаскировка и иммуногистохимическая окраска проводилась на автостейнере Leica Bond Max (Германия). Контролем иммуногистохимической реакции служила неиммунизированная кроличья и мышиная сыворотка. Результат реакции оценивали путем подсчета позитивно окрашенных клеток на 100 клеток в десяти полях зрения при увеличении х400, выражая результаты в процентах и единицах в поле зрения.
2. Окраска срезов тимуса гематоксилином и эозином для изучения общегистологической картины микропрепаратов и проведения линейных морфометрических измерений.
3. Компьютерная морфометрия с использованием лицензионных программ Leica application suite 3.6.0 и «Микроанализ». Данные обрабатывались статистически, достоверность определялась t-критерием Стьюдента.
Результаты исследования и обсуждение. Возрастная инволюция тимуса у крыс 6-10 месяцев сопровождается структурной перестройкой органа, которая проявляется в постепенном уменьшении доли лимфоидной ткани с увеличением количества жировой и фиброзной. Атрофия паренхимы железы выражается в снижении средней площади тимической дольки с 1,52 ±0,02 мм² у крыс 6 месяцев до 0,97 ±0,06 мм² (P
Источник
Препарат вилочковой железы крысы
В настоящее время накоплены значительные сведения о лечебных и профилактических эффектах различных пептидных препаратов тимуса в отношении целого ряда патологических процессов, их влиянии на состояние некоторых структур нейроэндокринной и иммунной систем, а также на стресс-лимитирующие процессы в ЦНС и реализацию высших интегративных функций мозга [1, 4, 10]. В то же время современные представления о взаимосвязи многоуровневых изменений в организме, вызванных действием пептидов тимуса, имеют фрагментарный характер. Закономерным этапом в развитии этих представлений является исследование влияния пептидных препаратов тимуса на структуру интегральных реакций организма. Целью настоящей работы явилось изучение изменений характера и напряженности общих неспецифических адаптационных реакций организма [2] при использовании тималина у экспериментальных животных предстарческого возраста.
Материалы и методы
Эксперименты проводили на 33 белых беспородных крысах-самцах в возрасте 19–20 месяцев (280–300 г) при соблюдении этических требований гуманного обращения с экспериментальными животными [6]. Препарат тималин, разведенный физиологическим раствором до концентрации 0.5 мг/мл, вводили внутримышечно в наружную поверхность бедра раз в 3 дня в течение 3 недель. При этом стартовая доза тималина составляла 0.14 мг/кг. В дальнейшем проводили изменение стартовой дозы препарата в пределах 0.14 – 0.40 мг/кг в соответствии с экспоненциальным режимом активационной терапии [2]. Использованные дозы, сопоставимые по значению с терапевтическими дозами тималина у людей [1], по своему биологическому действию на организм белых крыс могли быть аналогичны значительно более низким дозам (в 2–5 раз), в силу известной разницы в чувствительности людей и животных к целому ряду биологически активных веществ [7].
Для оценки характера и напряженности АР в ходе эксперимента использовали лейкоцитарную формулу и общее содержание лейкоцитов в крови, взятой из подкожной вены медиальной поверхности бедра. Лейкоцитарная формула рассчитывалась на 200 клеток. Сигнальным показателем характера АР служило относительное число лимфоцитов [2, 9]. Степень напряженности АР, отражающую уровень реактивности организма, на котором развивались АР, оценивали по выраженности отклонений от нормальных значений относительного содержания палочкоядерных нейтрофилов, моноцитов, эозинофилов и базофилов, а также общего содержания лейкоцитов [2].
По окончании эксперимента проводили декапитацию животных под эфирным наркозом. Определяли весовые коэффициенты (ВК) тимуса и надпочечников (вес органа в миллиграммах/вес животного в граммах), а также отношение веса тимуса к весу надпочечников – показателей, также используемых для характеристики АР [2, 9]. Изучение микрокартины тимуса проводили с помощью метода Браше, позволяющего выявлять нуклеопротеиды и оценивать зрелость и степень дифференцировки лимфоидных элементов, а также других клеток исследованного органа. Определяли стромально-паренхиматозный коэффициент (СПК), отражающий соотношение площади стромы и лимфоидной паренхимы тимуса, зависящее от активности лимфопролиферативных процессов в органе. Каждый случай характеризовался данными, полученными при анализе препарата в 10 полях зрения (х 400–900) в каждом из 3–5 срезов органа. По результатам ранжирования данных полуколичественного анализа препаратов тимуса в отдельных полях зрения и усреднения показателей по отдельным случаям оценивали относительное число тканевых базофилов ТБ), степень их дегрануляции, а также признаки их взаимодействия с тимоцитами – по взаимному расположению клеток этих двух видов («контакты»). При этом показатель дегрануляции ТБ мог изменяться в диапазоне от 0 («малое количество гранул у всех клеток и отсутствие признаков дегрануляции») до 3 («выраженная дегрануляция всех выявленных ТБ»). При статистической обработке результатов исследования использовали критерий Вилкоксона –Манна – Уитни и критерий Стьюдента, вариабельность полученных значений оценивали с помощью коэффициента вариации.
Результаты и обсуждение
К концу эксперимента у большинства крыс исследованных групп (более 80 %) относительное число лимфоцитов в лейкоцитарной формуле крови соответствовало АР спокойной или повышенной активации [2]. При этом у части самцов контрольной группы были повышены показатели содержания моноцитов (10–13 %), а также отмечалось наличие базофилов (1 %), что, согласно установленным ранее критериям, свидетельствовало о напряжении антистрессорных АР [2]. Гематологическим признакам напряженности АР у этих животных соответствовало снижение значения ВК тимуса и соотношения веса тимуса и надпочечников. Такие крысы-самцы были выделены в подгруппу 2, тогда как в подгруппу 1 вошли животные, у которых гематологические признаки напряженности отмечены не были, а ВК тимуса и отношение веса тимуса и надпочечников было выше значений этих показателей в подгруппе 2, соответственно в 1.7 и 1.4 раза (табл. 1). Выявленные различия позволяли говорить о более гармоничных регуляторных взаимоотношениях в организме крыс подгруппы 1, что указывало на более высокий уровень реактивности при развитии у них антистрессорных АР по сравнению с уровнем реактивности аналогичных АР у животных подгруппы 2.
В отличие от контрольной группы, в группе крыс, получавших тималин, не было выявлено отклонений параметров лейкоцитарной формулы и уровня лейкоцитов в крови от нормальных значений. В то же время анализ ВК тимуса и надпочечников, а также соотношения веса этих органов позволил выделить также и в этой группе две подгруппы животных, различавшихся по исследованным показателям. Аналогично различиям между подгруппами крыс контрольной группы, у животных, получавших тималин, которые составили подгруппу 1, были отмечены более высокие значения ВК тимуса и отношения веса тимуса к весу надпочечников, чем у самцов подгруппы 2 (табл. 1). При этом соотношения сравниваемых показателей в разных подгруппах животных, получавших тималин, совпадали с аналогичными соотношениями этих показателей у крыс разных подгрупп в контроле (1.7 и 1.4, соответственно, для ВК тимуса и отношения веса тимуса к весу надпочечников). Такой результат мог свидетельствовать о том, что у животных, получавших тималин, которые входили в разные подгруппы, так же, как и у крыс разных подгрупп контрольной группы, имелись отличия в уровнях реактивности, на которых развивались аналогичные антистрессорные АР.
Изменения в структуре адаптационных реакций (АР) организма белых беспородных
Источник
Тимусамин ® (Thymusamine) инструкция по применению
Владелец регистрационного удостоверения:
Контакты для обращений:
Лекарственная форма
рег. №: RU.77.99.88.003.E.003352.02.15 от 12.02.15 — Бессрочно
Форма выпуска, упаковка и состав продукта Тимусамин ®
Таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой от светло-кремового до кремового цвета, круглой формы, диаметром 7 мм, массой 0.155 мг; возможно наличие специфического запаха.
| 1 таб. | |
| тимусамин порошок* | 10 мг |
* комплекс полипептидов и нуклеиновых кислот, полученный из тимуса крупного рогатого скота.
Вспомогательные вещества: лактоза (наполнитель), сахар-песок (загуститель), крахмал картофельный (разрыхлитель), кальция стеарат (агент антислеживающий), дисперсия сополимера метакриловой кислоты (кишечнорастворимое покрытие), пропиленгликоль (эмульгатор).
20 шт. — блистеры (2) — пачки картонные.
Компоненты для Тимусамина, получаемые из вилочковой железы крупного рогатого скота, представляют собой комплекс специфичных белков и нуклеопротеидов ткани тимуса, которые обладают избирательным действием на клетки иммунной системы, способствуют ускоренному восстановлению функций как самой железы, так и иммунной системы организма в целом.
Клинические испытания Тимусамина проводились у 124 пациентов, подвергшихся длительному воздействию малых доз ионизирующего излучения (в т.ч. онкологических больных после лучевой и химиотерапии), и больных травматологического профиля с послеоперационными гнойно-септическими осложнениями.
Оценка эффективности применения Тимусамина сделана на основании динамики субъективных жалоб и объективных показателей лабораторных и инструментальных исследований, а также специализированных иммунологических проб (количество Т- и В-лимфоцитов; содержание иммуноглобулинов различных классов; функциональная активность Т-лимфоцитов; исследование активности тканевых ферментов).
В ходе клинических испытаний Тимусамина установлено, что курсовой прием способствует заметному улучшению общего состояния и, прежде всего, снижению выраженности астенического синдрома, характерного для вторичного иммунодефицита. У пациентов с гнойно-воспалительными осложнениями после хирургических вмешательств установлено достоверное повышение активности тканевых ферментов, что свидетельствует об интенсификации процессов тканевого метаболизма. Усиление тканевого метаболизма на фоне приема Тимусамина способствует интенсивному очищению раневой поверхности от некротизированных тканей и ускоренной эпителизации раны, что сокращает сроки лечения этой категории больных. У пациентов с последствиями лучевой и химиотерапии в ходе приема Тимусамина отмечались ускоренная нормализация иммунологических показателей периферической крови, улучшение общего самочувствия и снижение частоты возникновения инфекционных осложнений.
Тимусамин ® рекомендуется применять для ускорения восстановления функций иммунной системы после перенесенных инфекционных заболеваний, химио- и лучевой терапии, воздействия на организм различных экстремальных факторов (в т.ч. ионизирующего и СВЧ-излучения). Тимусамин ® также рекомендуется лицам старшего и пожилого возраста для поддержания устойчивой функции иммунной системы, особенно в осенний и весенний периоды года. Целесообразно для всех категорий населения систематическое применение Тимусамина в осенне-зимний (октябрь-ноябрь) и весенний (февраль-март) периоды года с целью профилактики ОРВИ.
Тимусамин ® показан для всех лиц средней и старшей возрастных групп в период неблагоприятных климатических условий как средство профилактики инфекционных заболеваний. Как базовое средство Тимусамин ® рекомендуется при лечении любой патологии, сопровождающейся иммунодефицитом. Указанный способ применения Тимусамина в комбинации с терапией основного заболевания в значительной степени повышает ее эффективность, а также способствует более благоприятному течению болезни.
Тимусамин ® является натуральным продуктом, не содержит консервантов, красителей и ароматизаторов.
В качестве биологически активной добавки к пище — источника полипептидов и нуклеиновых кислот при:
- острых и хронических воспалительных заболеваниях различной этиологии;
- генерализованных инфекциях;
- системных заболеваниях соединительной ткани;
- аутоиммунных заболеваниях различной этиологии;
- состояниях после экстремальных стрессорных нагрузок;
- в пред- и послеоперационный периоды при различных оперативных вмешательствах;
- в гериатрической практике.
Открыть список кодов МКБ-10
| Код МКБ-10 | Показание |
| B99 | Другие и неуточненные инфекционные болезни |
| D84.9 | Иммунодефицит неуточненный |
| M35.9 | Системные поражения соединительной ткани неуточненные (в т.ч. аутоимунная болезнь (системная) БДУ) |
| Z51.4 | Подготовительные процедуры для последующего лечения или обследования, не классифицированные в других рубриках |
| Z73.3 | Стрессовые состояния, не классифицированные в других рубриках (физическое и умственное напряжение) |
| Z98.8 | Другие уточненные послехирургические состояния |
Тимусамин ® рекомендуется принимать внутрь за 15-20 мин до еды, запивая водой, не разжевывая.
Взрослым назначают по 1-3 таб. 2-3 раза/сут.
Продолжительность применения — 10-14 дней. При хронической патологии оптимальным является проведение повторного курса через 3-6 месяцев.
Источник